Technische Parameter der Fluoreszenzmikroskopie Techniken und Methoden der Fluoreszenzmikroskopie
Technische Parameter des Fluoreszenzmikroskops 1. Weitwinkelokular 2. Achromatische Objektivlinse 3. Vierloch-Objektivlinsenkonverter 4. Epi-Fluoreszenzgerät Blaues (B) Grünes (G) Anregungssystem 100-W-Quecksilberlampe 5. Koaxialer Grob- und Feinfokus-Einstellmechanismus: Einstellung Fokusbereich: 15 mm Mikrobewegungsrasterwert: 0,002 mm 6. Doppelschichtiger mechanischer Tisch Längsbewegungsbereich: 70 mm Seitlicher Bewegungsbereich: 50 mm
Technische Parameter des Fluoreszenzmikroskops
1. Weitwinkelokular
2. Achromatische Objektivlinse
3. Objektivrevolver mit vier Blenden
4. Epi-Fluoreszenzgerät, blaues (B), grünes (G) Anregungssystem, 100-W-Quecksilberlampe
5. Koaxialer Grob- und Feinfokus-Einstellmechanismus: Fokusbereich 15 mm, Feinbewegungsrasterwert 0,002 mm
6. Doppelschichtige mechanische Werkbank
Vertikaler Bewegungsbereich: 70 mm. Seitlicher Bewegungsbereich: 50 mm
Fähigkeiten und Methoden der Fluoreszenzmikroskopie
(1) Glasobjektträger
Die Dicke des Glasobjektträgers sollte zwischen 0,8 und 1,2 mm liegen. Ein zu dicker Objektträger absorbiert einerseits mehr Licht, andererseits kann das Anregungslicht nicht auf die Probe konzentriert werden. Die Objektträger müssen glatt, gleichmäßig dick und frei von offensichtlicher Autofluoreszenz sein. Manchmal werden Objektträger aus Quarzglas verwendet.
(2) Abdeckglas
Die Dicke des Deckglases beträgt etwa 0,17 mm, glatt. Um das Anregungslicht zu verstärken, kann auch ein Interferenz-Deckglas verwendet werden, bei dem es sich um ein spezielles Deckglas handelt, das mit mehreren Schichten von Substanzen (z. B. Magnesiumfluorid) beschichtet ist, die unterschiedliche Interferenzeffekte auf Licht unterschiedlicher Wellenlänge haben, wodurch das Fluoreszenz verläuft reibungslos. Anregungslicht wird durchgelassen und reflektiert, und dieses reflektierte Anregungslicht regt die Probe an.
(3) Probe
Gewebeschnitte oder andere Proben sollten nicht zu dick sein. Ist sie zu dick, wird der Großteil des Anregungslichts im unteren Teil der Probe verbraucht, während der obere direkt von der Objektivlinse beobachtete Teil nicht vollständig angeregt wird. Darüber hinaus beeinflussen Zellüberlappungen oder Verunreinigungen die Beurteilung.
(4) Montagemittel
Glycerin wird üblicherweise als Befestigungsmittel verwendet, das keine Autofluoreszenz aufweisen darf, farblos und transparent ist und die Helligkeit der Fluoreszenz bei pH 8,5-9,5 heller ist und nicht leicht schnell verblasst. Daher wird üblicherweise eine gleiche Mischung aus Glycerin und 0,5 mol/l Carbonatpufferlösung mit einem pH-Wert von 9,{6}} bis 9,5 als Montagemittel verwendet.
(5) Spiegelöl
Im Allgemeinen muss bei der Beobachtung von Proben mit Dunkelfeld-Fluoreszenzmikroskopen und Ölimmersions-Immersionsobjektiven Immersionsöl verwendet werden. Am besten verwenden Sie spezielles, nicht fluoreszierendes Immersionsöl. Alternativ kann auch das oben genannte Glycerin und auch flüssiges Paraffin verwendet werden, allerdings ist der Brechungsindex niedrig, was sich geringfügig auf die Bildqualität auswirkt. Beeinflussen.
Das Prinzip und die strukturellen Eigenschaften des Fluoreszenzmikroskops
Bei der Fluoreszenzmikroskopie wird ein Punkt mit hoher Lichtausbeute verwendet, um Licht einer bestimmten Wellenlänge (z. B. ultraviolettes Licht von 3650 Zoll oder violett-blaues Licht von 4200 Zoll) durch das Filtersystem als Anregungslicht zu emittieren, um die fluoreszierenden Substanzen in der Probe zur Emission von Fluoreszenz anzuregen verschiedene Farben Beobachten Sie anschließend durch die Vergrößerung des Objektivs und des Okulars. Auf diese Weise ist es vor einem kontrastreichen Hintergrund selbst bei sehr schwacher Fluoreszenz leicht zu identifizieren und weist eine hohe Empfindlichkeit auf. Es wird hauptsächlich zur Erforschung der Zellstruktur und -funktion sowie der chemischen Zusammensetzung verwendet. Der Grundaufbau eines Fluoreszenzmikroskops besteht aus einem gewöhnlichen optischen Mikroskop und einigen Zubehörteilen (z. B. einer Fluoreszenzlichtquelle, einem Anregungsfilter, einem Zweifarben-Strahlteiler und einem Sperrfilter usw.). Fluoreszierende Lichtquelle: Verwenden Sie im Allgemeinen eine Ultrahochdruck-Quecksilberlampe (50-200W), die Licht verschiedener Wellenlängen emittieren kann, aber jede fluoreszierende Substanz hat eine Anregungswellenlänge, die die stärkste Fluoreszenz erzeugt, daher ist ein Anregungsfilter (im Allgemeinen) (es gibt ultraviolette, violette, blaue und grüne Anregungsfilter), die nur Anregungslicht einer bestimmten Wellenlänge durchlassen und die Probe bestrahlen lassen, während sie anderes Licht absorbieren. Nachdem jede Substanz mit Anregungslicht bestrahlt wurde, emittiert sie in sehr kurzer Zeit sichtbare Fluoreszenz mit einer längeren Wellenlänge als der Bestrahlungswellenlänge. Fluoreszenz ist spezifisch und im Allgemeinen schwächer als Anregungslicht. Um spezifische Fluoreszenz zu beobachten, muss eine Blockierung (oder Unterdrückung) hinter der Objektivlinse hinzugefügt und in Verbindung damit verwendet werden.
Der Unterschied zwischen Fluoreszenzmikroskop und gewöhnlichem Mikroskop
1. Die Beleuchtungsmethode ist normalerweise episkopisch, das heißt, die Lichtquelle wird durch die Objektivlinse auf die Probe projiziert;
2. Die Lichtquelle ist ultraviolettes Licht, die Wellenlänge ist kürzer und die Auflösung ist höher als bei gewöhnlichen Mikroskopen;
3. Es gibt zwei spezielle Filter: Der vor der Lichtquelle dient zum Herausfiltern von sichtbarem Licht und der zwischen Okular und Objektiv dient zum Herausfiltern von ultravioletten Strahlen zum Schutz des menschlichen Auges.
Das Fluoreszenzmikroskop ist ebenfalls eine Art optisches Mikroskop. Der Hauptunterschied besteht darin, dass die Anregungswellenlänge der beiden unterschiedlich ist. Dies bestimmt den Unterschied zwischen dem Fluoreszenzmikroskop und dem gewöhnlichen optischen Mikroskop in Bezug auf Aufbau und Verwendung.
Die Fluoreszenzmikroskopie ist ein wesentliches Werkzeug in der Immunfluoreszenzzytochemie. Es besteht aus Hauptkomponenten wie Lichtquelle, Filterplattensystem und optischem System. Dabei wird eine bestimmte Lichtwellenlänge verwendet, um die Probe zur Emission von Fluoreszenz anzuregen und das Fluoreszenzbild der Probe durch Verstärkung des Objektivlinsen- und Okularsystems zu beobachten.
