Direkte Zählung von Mikroorganismen mit einem Mikroskop
Experimentelles Prinzip
Die direkte Zählung unter dem Mikroskop mit einem Hämozytometer ist eine häufig verwendete Methode zur Keimzählung. Der Vorteil dieser Methode besteht darin, dass sie intuitiv und schnell ist. Geben Sie die entsprechend verdünnte Bakteriensuspension (oder Sporensuspension) in die Zählkammer zwischen Objektträger und Deckglas des Hämozytometers und zählen Sie unter dem Mikroskop. Da das Volumen der Zählkammer fest ist (0.1 mm2), kann es entsprechend der unter dem Mikroskop beobachteten Anzahl von Mikroorganismen in die Gesamtzahl der Mikroorganismen pro Volumeneinheit umgerechnet werden. Da bei dieser Methode die Summe der lebenden und toten Bakterien gezählt wird, wird sie auch Gesamtkeimzählmethode genannt.
Ein Hämozytometer ist normalerweise ein spezieller Objektträger aus Glas, auf dem vier Rillen drei Plattformen bilden. Die Plattform in der Mitte ist durch eine kurze horizontale Nut in zwei Hälften geteilt. Auf jeder Seite der Plattform ist ein Gitter eingraviert. Jedes Gitter ist in neun große Quadrate unterteilt. Der große Platz in der Mitte ist der Zählraum. In der Zählkammer werden Mikroorganismen gezählt. Der Aufbau der Blutzellenzähltafel ist in Abbildung Ⅷ-1 dargestellt.
Die Skala des Zählraums weist im Allgemeinen zwei Spezifikationen auf: Eine besteht darin, dass ein großes Quadrat in 16 mittlere Quadrate unterteilt ist und jedes mittlere Quadrat in 25 kleine Quadrate unterteilt ist (Abbildung Ⅷ-2); das andere ist ein großes Quadrat. Das Quadrat ist in 25 mittlere Quadrate unterteilt, und jedes mittlere Quadrat ist in 16 kleine Quadrate unterteilt (Abbildung Ⅷ-1, C). Aber egal um welche Art von Zählbrett es sich handelt, die Anzahl der kleinen Quadrate in jedem großen Quadrat ist gleich, also 16×25=400 kleine Quadrate, wie in Abbildung Ⅷ-2 dargestellt.
Die Seitenlänge jedes großen Quadrats beträgt 1 mm und die Fläche jedes großen Quadrats beträgt 1 mm2. Nachdem das Deckglas abgedeckt ist, beträgt die Höhe zwischen Objektträgerglas und Deckglas 0,1 mm, sodass das Volumen der Zählkammer 0,1 mm3 beträgt.
Beim Zählen wird normalerweise die Gesamtzahl der Bakterien in den fünf mittleren Gittern gezählt, dann der Durchschnittswert jedes mittleren Gitters ermittelt und dann mit 16 oder 25 multipliziert, um die Gesamtzahl der Bakterien in einem großen Gitter zu erhalten, und dann in umgerechnet Gesamtzahl der Bakterien in 1 ml Bakterienlösung.
Laborausrüstung
Hämozytometer, Mikroskop, Deckglas, sterile Kapillare;
Experimentelle Materialien
Saccharomyces cerevisiae-Suspension
Versuchsdurchführung (direkte Zählmethode des Mikrobenmikroskops)
1. Verdünnung
Verdünnen Sie die Saccharomyces cerevisiae-Suspension ordnungsgemäß. Wenn die Bakterienlösung nicht dick ist, muss sie nicht verdünnt werden.
2. Mikroskopischer Zählraum
Führen Sie vor der Probenzugabe eine mikroskopische Inspektion der Zählkammer der Zählplatte durch. Wenn Schmutz vorhanden ist, muss dieser vor dem Zählen gereinigt werden.
3. Probe hinzufügen
Decken Sie die saubere und trockene Hämozytometerplatte mit einem Deckglas ab und tropfen Sie dann mit einer sterilen Pipette mit feiner Öffnung einen kleinen Tropfen der verdünnten Saccharomyces cerevisiae-Lösung vom Rand des Deckglases (nicht zu viel), damit sich die Bakterien lösen liegt in der Nähe der Lücke entlang der Lücke. Die Kapillarosmose dringt von selbst in die Zählkammer ein und die allgemeine Zählkammer kann mit Bakterienflüssigkeit gefüllt werden. Achten Sie darauf, dass keine Luftblasen entstehen.
4. Mikroskopzählung
Platzieren Sie das Hämozytometer nach einer Ruhezeit von 5 Minuten auf dem Tisch des Mikroskops, ermitteln Sie zunächst mit einer Linse mit geringer Leistung die Position der Zählkammer und wechseln Sie dann zum Zählen zu einer Linse mit hoher Leistung. Wenn vor der Zählung festgestellt wird, dass die Bakterienlösung zu dick oder zu dünn ist, muss die Verdünnung vor der Zählung erneut angepasst werden. Im Allgemeinen erfordert die Probenverdünnung etwa 5-10 Bakterien in jeder Zelle. Jede Zählkammer wählt die Bakterien in 5 Mittelgittern (optional 4 Eck- und Mittelgitter) zur Zählung aus. Die Bakterien auf der Gitterlinie werden im Allgemeinen nur auf der oberen und rechten Linie gezählt. Wenn bei Hefeknospen die Größe des Knospenkörpers die Hälfte der Mutterzelle erreicht, zählen Sie zwei Bakterien. Zählen Sie eine Probe, um aus den in den beiden Zählkammern gezählten Werten den Bakteriengehalt der Probe zu berechnen.
5. Reinigung des Hämozytometers
Spülen Sie die Blutzellenzählplatte nach Gebrauch am Wasserhahn mit Wasserstrahlen ab, waschen Sie sie nicht mit harten Gegenständen und trocknen Sie sie nach dem Waschen selbst oder mit einem Fön ab. Beobachten Sie bei der mikroskopischen Untersuchung, ob in jeder Zelle Restbakterien oder andere Sedimente vorhanden sind. Wenn es nicht sauber ist, muss es wiederholt gewaschen werden, bis es sauber ist.
