Welche Probenspezifikationen werden für die Lichtmikroskopie benötigt?
Bei der Probenvorbereitung des optischen Mikroskops liegt die Schichtdicke der Probe zwischen 2-25um; Die Schichtdicke des Elektronenmikroskops liegt innerhalb von 50-100nm (mit Ausnahme des Hochspannungselektronenmikroskops, dessen Probendicke 1 µm erreichen kann), sodass die verwendete Schichtmethode nicht alle gleich ist.
Was den Träger betrifft, so ist der Träger des optischen Mikroskopabschnitts ein Glasobjektträger, während der Träger des Elektronenmikroskopabschnitts ein Gitter ist.
Was die Fixierung betrifft, werden die Schichten des optischen Mikroskops mit einem zusammengesetzten Fixiermittel fixiert, während die Schichten des Elektronenmikroskops wiederholt mit einem einzigen Fixiermittel fixiert werden.
Hinsichtlich der Färbung ist die Färbung optischer Proben relativ einfach. Je nach Beobachtungsprobe und Art des Lichtmikroskops reicht es in der Regel aus, mit einigen festen Färbemitteln zu färben. Es gibt viele und komplizierte Methoden zur Nachfärbung elektronenmikroskopischer Proben, wie z. B. Negativfärbung, Silberfärbung usw.
Im Hinblick auf die Einbettung werden Paraffin, Kollodium, Gelatine usw. als Einbettungsmittel für optische Mikroskopschnitte verwendet; Als Einbettungsmittel für Elektronenmikroskopschnitte werden Epoxidharz, Polystyrolharz, Isobutylenharz und wasserlösliches Harz verwendet.
Um sicherzustellen, dass das Sichtfeld des Mikroskops gleichmäßig und vollständig ausgeleuchtet werden kann, muss das optische Beleuchtungssystem bei der Erstinstallation und Fehlerbehebung des Mikroskops angepasst werden. Dies ist ein wichtiges Mittel und die grundlegendste Möglichkeit, das Mikroskop richtig zu verwenden und korrekte und zuverlässige Ergebnisse zu erzielen. Anforderungen. Darüber hinaus ist die korrekte Beherrschung der Einstellung des Beleuchtungsstrahlengangsystems ein notwendiger Schritt nach dem Austausch der Lichtquellenlampe während der Verwendung des Mikroskops und auch ein notwendiges Mittel, um die Leistung des Mikroskops von Zeit zu Zeit im Alltag zu überprüfen verwenden. Die Einstellung des optischen Wegsystems der Mikroskopbeleuchtung umfasst hauptsächlich die folgenden vier Punkte: 1. Vorläufige Einstellung der Lichtquellenlampenkammer außerhalb des Mikroskops ① Öffnen Sie zuerst das Gehäuse der Lampenkammer und drücken Sie auf die Federklammer, um die Halogenlampe einzusetzen Vermeiden Sie während der Installation den direkten Kontakt mit der Glühbirne mit den Fingern (kann mit einem weichen Tuch oder Papier entfernt werden), um Fingerabdrücke und anderen Schmutz auf der Glühbirne zu vermeiden, der die Lebensdauer der Glühbirne beeinträchtigt. ②Stellen Sie das Lampengehäuse auf den Tisch, schalten Sie den Strom ein und stellen Sie mit einem Spezialschraubendreher das Fokusknopfloch der Lampe (gekennzeichnet mit „←→“) so ein, dass der Glühfaden auf die Wand projiziert wird 1-2 m entfernt und das Filamentbild wird angepasst. Passen Sie dann die Höhe der Lampe an und passen Sie das Gewindeloch (gekennzeichnet mit „──“) an, um die richtige Position des Glühfadens zu erreichen. Passen Sie dann die linke und rechte Position der Lampe an, um das Schraubenloch (mit „──“ gekennzeichnet) so anzupassen, dass die linke und rechte Position des Glühfadens geeignet ist.
2. Der Zweck der Überprüfung und Korrektur der Position des Lichtquellenleuchtmittels (Filaments) im Mikroskop besteht darin, das Bildende des Leuchtmittels genau in das Sichtfeld der Objektivlinse auszurichten und sicherzustellen, dass das Sichtfeld von Das Mikroskop wird aus Sicht der Lichtquelle vollständig und gleichmäßig ausgeleuchtet. Beleuchtung, die Voraussetzung für die Anpassung des Kuhler-Beleuchtungssystems ist. Benötigte Grundwerkzeuge: Das Zentrierteleskop ist beim Kauf des Mikroskops ausgestattet. ① Ziehen Sie die Milchglashülse im Lampengehäuse ab und setzen Sie das Lampengehäuse wieder auf das Mikroskop. ② Wählen Sie ein 10-fach-Objektiv, schalten Sie das Lichtquellenprogramm ein, um die Probe zu finden und klar zu fokussieren, und verwenden Sie dann ein 40-fach-Objektiv, um die Probe klar zu fokussieren (40-fach-Objektiv). Sie können das gesamte Bild des Filaments sehen ); ③ Öffnen Sie die Aperturblende und die Feldblende des Kondensors maximal; ④ Ziehen Sie eines der Okulare heraus, ersetzen Sie es durch ein Zentrierteleskop, fassen Sie den weißen Teil und strecken Sie das schwarze Okular mit der anderen Hand. Sie können das Filamentbild im Sichtfeld sehen. ⑤ Wenn die Position des Filaments nicht geeignet ist, passen Sie das Loch „──“ an, um das Filamentbild in horizontaler Richtung anzupassen, und passen Sie das Loch „──“ an, um das Filamentbild in vertikaler Richtung anzupassen, bis Sie das Filamentbild anpassen zum hellen kreisförmigen Bild, das gerade die Apertur der Objektivlinse ausfüllt; ⑥ Setzen Sie nach der Einstellung die Milchglashülse wieder in die ursprüngliche Position ein, ziehen Sie den Stecker des Zentrierteleskops ab und setzen Sie das Okular für die nächste Einstellung wieder ein. Die oben erwähnte Einstellung der Beleuchtungslichtquellen-Lampenkammer außerhalb des Mikroskops und die Überprüfung der Position des Lichtquellen-Leuchtkörpers innerhalb des Mikroskops müssen nur durchgeführt werden, wenn das Mikroskop zum ersten Mal installiert und debuggt wird und wenn die Glühbirne ausgetauscht wird , und das Mikroskop kann bei Verwendung des Mikroskops nicht zufällig eingestellt werden. Im Falle einer Verwechslung kann es gemäß den oben genannten Schritten wieder in den ursprünglichen Zustand zurückversetzt werden.
3. Richtige Einstellung des Kohler-Beleuchtungssystems Eine der Hauptaufgaben der richtigen Einstellung des Mikroskops ist die Einstellung des Beleuchtungsstrahlengangsystems, und der Schlüssel liegt in der Einstellung des Kohler-Beleuchtungssystems. Jeder Benutzer eines Mikroskops, insbesondere derjenige, der Mikrofotografien anfertigt, sollte über ein gewisses Verständnis und eine gewisse Beherrschung des Prinzips des Kuhler-Beleuchtungssystems und seiner Einstellschritte verfügen, um die Funktionen des Mikroskops und das Aufnehmen von Bildern voll nutzen zu können. Die resultierenden Fotos können konsistenter und perfekter wirken. Das Prinzip des Kohler-Beleuchtungssystems ist einfach: Das von jedem Punkt auf der Lichtquelle emittierte Licht kann das Sichtfeld des Mikroskops beleuchten, und das von jedem Punkt auf der Lichtquelle emittierte Licht wird im Feld gesammelt Sichtfeld des Mikroskops Es wird eine sehr volle und gleichmäßige Ausleuchtung erreicht. Der Zweck der Einstellung des Kuhler-Beleuchtungssystems besteht darin, eine gleichmäßige und ausreichende Beleuchtung für das beobachtete Sichtfeld zu erreichen und zu verhindern, dass Streulicht das Bildsystem beeinträchtigt oder stört, um ein Beschlagen des Films während der Fotografie zu vermeiden. Notwendige Komponenten für ein Kohler-Beleuchtungssystem mit hoher Anpassungsfähigkeit: Feldblende, Kondensorlinsensystem, das auf der Achse eingestellt werden kann. ① Wählen Sie ein 10×-Objektiv und ein 10×-Okular. ② Bringen Sie die vordere Linse des Kondensors in den Strahlengang, stellen Sie die Aperturblende auf eine moderate Position ein (nicht zu groß oder zu klein) und heben Sie dann den Kondensor auf die Position an obere Position und stellen Sie den Kondensordrehteller auf die Hellfeld-Position „J“ ein. ③ Stellen Sie die Feldblende auf das Minimum (0,1) ein.
④ Legen Sie die versiegelte biologische Probe auf den Tisch, schalten Sie die Lichtquelle ein und fokussieren Sie deutlich
⑤ Im Sichtfeld befindet sich ein teilweise beleuchteter Bereich oder heller Fleck, bei dem es sich um das unscharfe Bild der Leuchtfeldblende handelt, in dem die Details der Probe deutlich zu erkennen sind. Außerhalb befindet sich ein dunkleres Sichtfeld, das die Details der Probe möglicherweise nicht unbedingt klar erkennen lässt
⑥Stellen Sie den Kondensor leicht nach unten, so dass der helle Fleck im Sichtfeld allmählich kleiner wird und allmählich ein klares polygonales Bild entsteht, das das klare Bild der Feldblende darstellt.
⑦Im Allgemeinen befindet sich das Polygonbild nicht in der Mitte des Sichtfelds, und es ist notwendig, ein Paar Zentrierschrauben des Kondensors einzustellen, um das Polygonbild der Feldblende auf die zentrale Position einzustellen;
⑧Öffnen Sie nach und nach die Blende des Sichtfelds, um das Polygonbild zu einem eingeschriebenen Polygon des Sichtfelds zu machen, und überprüfen Sie den Ausrichtungsstatus weiter. Wenn die Ausrichtung nicht ideal ist, fahren Sie mit der Feineinstellung der Ausrichtungsschraube fort;
⑨Öffnen Sie die Blende des Sichtfelds leicht, sodass das polygonale Bild gerade am Rand des Sichtfelds verschwindet. Bisher ist die Anpassung des Kohler-Beleuchtungssystems abgeschlossen. Nachdem das Kohler-Beleuchtungssystem angepasst wurde, ist das gesamte Sichtfeld gleichmäßig ausgeleuchtet und die aufgenommenen Mikroaufnahmen sind hell und klar mit normalem Kontrast.
