Was sind die besonderen Aufbaukomponenten eines Fluoreszenzmikroskops?
Der Farbfilterblock ist ein wichtiger Bestandteil eines Fluoreszenzmikroskops und seine Kernkomponenten bestehen aus einem ersten Sperrfilter für Anregungslicht, einem zweiten Sperrfilter für Emissionslicht und einem Strahlteilerspiegel. Die Farbfiltermodelle und Namen verschiedener Hersteller sind oft uneinheitlich.
1. Anregungslichtfilter und Emissionslichtfilter: Basierend auf den Eigenschaften der Lichtquelle und des fluoreszierenden Pigments werden normalerweise die folgenden drei Arten der Anpassung ausgewählt, um Anregungslicht innerhalb eines bestimmten Wellenlängenbereichs bereitzustellen und die von der Probe angeregte Fluoreszenz durchzulassen und das Okular für die Bildgebung zu erreichen.
UV-Anregung: Der Anregungslichtfilter kann UV-Licht durchlassen und sichtbares Licht über 400 nm daran hindern. Der entsprechende Emissionslichtfilter lässt blaues Licht durch und das Licht im Sichtfeld erscheint blau, beispielsweise bei der Anwendung bei der DAPI-Färbung.
Blaulichtanregung: Der Anregungslichtfilter kann blaues Licht durchlassen und Licht anderer Wellenlängen blockieren. Der entsprechende Emissionslichtfilter lässt grünes Licht durch, beispielsweise für GFP-Färbemarker.
Anregung mit grünem Licht: Der Anregungslichtfilter lässt grünes Licht durch und blockiert Licht anderer Wellenlängen. Der entsprechende Emissionslichtfilter lässt in der Regel rotes Licht durch, wie z. B. Rhodamin-Färbung.
2. Halbtransparenter und halbreflektierender Farbfilter: Seine Funktion besteht darin, das Anregungslicht vollständig am Durchdringen zu hindern und es zu reflektieren; Und emittieren Licht im entsprechenden Wellenlängenbereich. Sein Modell entspricht dem Anregungslichtfilter und dem Emissionslichtfilter.
(2) Objektiv und Okular
Es können verschiedene Objektive verwendet werden, am besten wählen Sie jedoch Objektive mit zusätzlicher Skalierung und Reduzierung der chromatischen Aberration, da ihre Eigenfluoreszenz extrem gering ist und ihre Lichtdurchlässigkeit (Wellenlängenbereich) für Fluoreszenz geeignet ist. Da die Fluoreszenzhelligkeit eines Bildes im Mikroskopfeld direkt proportional zum Quadrat des Öffnungsverhältnisses der Objektivlinse und umgekehrt proportional zu ihrer Vergrößerung ist, sollte zur Verbesserung der Helligkeit von Fluoreszenzbildern eine Objektivlinse mit einem größeren Öffnungsverhältnis verwendet werden. Insbesondere bei Präparaten mit unzureichender Fluoreszenz sollte ein Objektiv mit hohem Öffnungsverhältnis und hoher Lichtdurchlässigkeit sowie ein Okular mit möglichst geringer Vergrößerung verwendet werden.
(3) Andere optische Geräte
Die reflektierende Schicht eines Spiegels ist normalerweise mit Aluminium beschichtet, da Aluminium im blauvioletten Bereich weniger ultraviolettes und sichtbares Licht absorbiert und über 90 % reflektiert (während Silber nur ein Reflexionsvermögen von 70 % hat). Im Allgemeinen werden flache Spiegel verwendet. Fokussierungslinsen, die speziell für Fluoreszenzmikroskope entwickelt und hergestellt werden, bestehen aus Quarzglas oder einem anderen Glas, das ultraviolettes Licht durchlässt. Das Falllichtgerät hat nicht nur die Funktion einer durchlässigen Lichtquelle, sondern eignet sich auch besser für die direkte Beobachtung undurchsichtiger und halbtransparenter Proben, wie z. B. dicker Platten, Filtermembranen, Bakterienkolonien, Gewebekulturen und anderer Proben. In den letzten Jahren wurden viele neue Arten von Fluoreszenzmikroskopen entwickelt, die ein Falllichtgerät verwenden, das sogenannte Falllicht-Fluoreszenzmikroskop.
(4) Lichtquelle
Heutzutage werden üblicherweise Quecksilberhochdrucklampen mit 50 oder 100 W als Lichtquellen verwendet. Während des Betriebs kommt es zu einer Entladung zwischen zwei Elektroden, wodurch Quecksilber verdampft und der Druck im Inneren der Kugel schnell ansteigt (dieser Vorgang dauert normalerweise etwa 5-15 Minuten). Bei diesem Vorgang werden Lichtquanten emittiert, deren Wellenlänge ausreicht, um verschiedene fluoreszierende Stoffe anzuregen. Daher wird es häufig in Fluoreszenzmikroskopen verwendet.
Die Lebensdauer von Quecksilberlampen ist relativ kurz und beträgt in der Regel 200 Stunden. Als Reaktion auf diese begrenzte Lebensdauer wurde in den letzten Jahren eine neue Art von Fluoreszenzlichtquelle X-Cite mit einer extrem langen Lampenlebensdauer von 2000 Stunden und flexiblem Einsatz weit verbreitet eingesetzt - kein Vorheizen erforderlich, sofort einsatzbereit.
