Drei Arten der Mikroskopbeobachtung
I. Hellfeld BF (Hellfeld BF)
Hellfeld-BF ist eine bekannte Methode der Mikroskopie, die in der Pathologie und bei Tests häufig zur Beobachtung gefärbter Schnitte verwendet wird. Alle Mikroskope sind in der Lage, diese Funktion auszuführen.
Hellfeld
II. Dunkelfeld-DF (Dunkelfeld-DF)
Dunkelfeld-DF ist eigentlich Dunkelfeldbeleuchtung. Es unterscheidet sich vom Hellfeld dadurch, dass es nicht direkt das beleuchtete Licht beobachtet, sondern das vom untersuchten Objekt reflektierte oder gebeugte Licht. Dadurch wird das Sichtfeld zu einem dunklen Hintergrund, während das untersuchte Objekt als helles Bild erscheint.
Das Prinzip des dunklen Sichtfelds basiert auf dem Tyndall-Phänomen in der Optik. Bei starker Lichteinstrahlung kann Staub durch direktes Licht vom menschlichen Auge nicht beobachtet werden, da dies auf das starke Licht in der Umgebung zurückzuführen ist. Wenn Licht schräg darauf gerichtet ist, scheinen die Partikel aufgrund der Lichtreflexion an Größe zuzunehmen und für das menschliche Auge sichtbar zu werden.
Ein für die Dunkelfeldbeobachtung erforderliches Spezialzubehör ist ein Dunkelfeld-Spektiv. Es zeichnet sich dadurch aus, dass der Lichtstrahl das untersuchte Objekt nicht von unten nach oben durchdringt, sondern den Lichtweg so ändert, dass er schräg auf das untersuchte Objekt gerichtet ist, sodass das Beleuchtungslicht nicht direkt in die Objektivlinse eintritt und durch die Verwendung des von der Oberfläche des untersuchten Objekts reflektierten oder gebeugten Lichts ein helles Bild entsteht. Die Auflösung der Dunkelfeldbeobachtung ist viel höher als die der Hellfeldbeobachtung, * bis zu 0.02-0.004
Dunkles Feld
Phasenkontrast PH
Bei der Entwicklung der optischen Mikroskopie ist die erfolgreiche Erfindung des Phasenkontrasts PH eine wichtige Errungenschaft in der modernen Mikroskopietechnologie. Wie wir wissen, kann das menschliche Auge nur die Wellenlänge (Farbe) und Amplitude (Helligkeit) von Lichtwellen unterscheiden. Bei farblosen und hellen biologischen Proben ändern sich Wellenlänge und Amplitude beim Durchgang des Lichts nicht wesentlich, und es ist schwierig, die Probe im Hellfeld zu beobachten.
Das Phasenkontrastmikroskop nutzt den Unterschied der Lichtreichweite des untersuchten Objekts zur mikroskopischen Untersuchung, d. h. es nutzt effektiv das Interferenzphänomen des Lichts, um den für das menschliche Auge nicht wahrnehmbaren Phasenunterschied in einen wahrnehmbaren Amplitudenunterschied umzuwandeln, und sogar farblose und transparente Substanzen können deutlich sichtbar werden. Dies erleichtert die Beobachtung lebender Zellen erheblich, weshalb die Phasenkontrastmikroskopie häufig in invertierten Mikroskopen verwendet wird.
Das Grundprinzip der Phasenkontrastmikroskopie besteht darin, dass der Unterschied im optischen Bereich des durch eine Probe übertragenen sichtbaren Lichts in einen Unterschied in der Amplitude umgewandelt wird, wodurch der Kontrast zwischen verschiedenen Strukturen erhöht und diese sichtbar gemacht werden. Das Licht wird durch die Probe gebrochen und weicht vom ursprünglichen Lichtweg ab, während es um 1/4λ (Wellenlänge) verzögert wird. Wenn 1/4λ wieder erhöht oder verringert wird, wird der Unterschied im optischen Bereich 1/2λ, und die Interferenz zwischen den beiden Photosynthesestrahlen wird verstärkt, nachdem die Achsen der beiden Strahlen interferiert haben, und die Amplitude erhöht oder verringert sich, wodurch der Kontrast verbessert wird. In der Struktur weist das Phasenkontrastmikroskop zwei besondere Merkmale auf, die sich von gewöhnlichen optischen Mikroskopen unterscheiden:
1. Die Ringblende (Ringblende) befindet sich zwischen der Lichtquelle und dem Kondensator. Ihre Aufgabe besteht darin, das durch den Kondensator fallende Licht in einem hohlen Lichtkegel zu bündeln und auf die Probe zu fokussieren.
2. Phasenplatte (ringförmige Phasenplatte) In der Objektivlinse befindet sich eine mit Magnesiumfluorid beschichtete Phasenplatte, die direktes oder gebeugtes Licht um 1/4λ verzögert. Es gibt zwei Arten:
1. Eine Phasenplatte: Das direkte Licht wird um 1/4 λ verzögert, die beiden Gruppen von Lichtwellen werden koaxial zu den Lichtwellen addiert, die Amplitude nimmt zu, die Struktur der Probe ist heller als das umgebende Medium, es entsteht ein heller Kontrast (oder negativer Kontrast).
2.B Phasenplatte: Das gebeugte Licht wird um 1/4 λ verzögert, die Achse der Lichtwelle wird nach der Verschmelzung der beiden Lichtwellengruppen kleiner, die Amplitude wird kleiner, es entsteht ein Dunkelkontrast (oder positiver Kontrast), die Struktur ist dunkler als das umgebende Medium.
