Das Prinzip, die Eigenschaften und die Anwendung des Fluoreszenzmikroskops
Das Prinzip und die strukturellen Eigenschaften des Fluoreszenzmikroskops: Das Fluoreszenzmikroskop verwendet eine Punktlichtquelle mit hoher Lichtausbeute, um eine bestimmte Lichtwellenlänge (z. B. ultraviolettes Licht 3650 Zoll oder violett-blaues Licht 4200 Zoll) durch das Filtersystem als Anregung zu emittieren Licht, um die Fluoreszenz in der Probe anzuregen. Nachdem die Substanz Fluoreszenz in verschiedenen Farben emittiert hat, wird sie durch die Vergrößerung des Objektivs und des Okulars beobachtet. Auf diese Weise ist es vor einem kontrastreichen Hintergrund selbst bei sehr schwacher Fluoreszenz leicht zu identifizieren und weist eine hohe Empfindlichkeit auf. Es wird hauptsächlich zur Erforschung der Zellstruktur und -funktion sowie der chemischen Zusammensetzung verwendet. Der Grundaufbau eines Fluoreszenzmikroskops besteht aus einem gewöhnlichen optischen Mikroskop und einigen Zubehörteilen (z. B. einer Fluoreszenzlichtquelle, einem Anregungsfilter, einem Zweifarben-Strahlteiler und einem Sperrfilter usw.). Fluoreszierende Lichtquelle: Verwenden Sie im Allgemeinen eine Ultrahochdruck-Quecksilberlampe (50-200W), die Licht verschiedener Wellenlängen emittieren kann, aber jede fluoreszierende Substanz hat eine Anregungswellenlänge, die die stärkste Fluoreszenz erzeugt, daher ist ein Anregungsfilter (im Allgemeinen) (es gibt ultraviolette, violette, blaue und grüne Anregungsfilter), die nur Anregungslicht einer bestimmten Wellenlänge durchlassen und die Probe bestrahlen lassen, während sie anderes Licht absorbieren. Nachdem jede Substanz mit Anregungslicht bestrahlt wurde, emittiert sie in sehr kurzer Zeit sichtbare Fluoreszenz mit einer längeren Wellenlänge als der Bestrahlungswellenlänge. Fluoreszenz ist spezifisch und im Allgemeinen schwächer als Anregungslicht. Um spezifische Fluoreszenz zu beobachten, ist hinter der Objektivlinse ein Sperrfilter (oder Unterdrückungsfilter) erforderlich.
Es hat zwei Funktionen: Zum einen soll es das Anregungslicht absorbieren und daran hindern, in das Okular einzudringen, um die Fluoreszenz nicht zu stören und die Augen nicht zu schädigen. Die andere besteht darin, die spezifische Fluoreszenz auszuwählen und durchzulassen, wodurch eine bestimmte fluoreszierende Farbe angezeigt wird. Die beiden Filter müssen zusammen verwendet werden.
Hinsichtlich ihres Strahlengangs unterscheidet man zwei Arten von Fluoreszenzmikroskopen:
1. Transmissionsfluoreszenzmikroskop: Die Anregungslichtquelle wird durch eine Kondensorlinse durch das Probenmaterial geleitet, um Fluoreszenz anzuregen. Üblicherweise wird ein Dunkelfeldkollektor verwendet, und ein gewöhnlicher Kollektor kann auch verwendet werden, um den Spiegel so einzustellen, dass das Anregungslicht umgelenkt und auf die Probe umgeleitet wird. Dies ist ein älteres Fluoreszenzmikroskop. Der Vorteil besteht darin, dass die Fluoreszenz bei geringer Vergrößerung stark ist, der Nachteil besteht jedoch darin, dass die Fluoreszenz mit zunehmender Vergrößerung abnimmt. Daher ist es besser, größere Probenmaterialien zu beobachten.
2. Das Epi-Fluoreszenzmikroskop ist eine neue Art von Fluoreszenzmikroskop, das in der Neuzeit entwickelt wurde. Der Unterschied besteht darin, dass das Anregungslicht von der Objektivlinse auf die Oberfläche der Probe fällt, d. h. dieselbe Objektivlinse wird als Beleuchtungskondensor und als Objektivlinse zum Sammeln der Fluoreszenz verwendet. Im Lichtweg muss ein dichroitischer Strahlteiler hinzugefügt werden, der 45 Grad vom hellen Uran entfernt ist. Das Anregungslicht wird in die Objektivlinse reflektiert und auf der Probe gesammelt. Die von der Probe erzeugte Fluoreszenz und das von der Linsenoberfläche der Objektivlinse und der Deckglasoberfläche reflektierte Anregungslicht treten gleichzeitig in die Objektivlinse ein und kehren zum Zweifarbenstrahlteiler zurück, um das Anregungslicht von der Fluoreszenz zu trennen , restliches Anregungslicht wird durch Sperrfilter absorbiert. Durch den Wechsel zu einer Kombination aus verschiedenen Anregungsfiltern, zweifarbigen Strahlteilern und Sperrfiltern können die Anforderungen verschiedener fluoreszierender Reaktionsprodukte erfüllt werden. Der Vorteil dieser Art von Fluoreszenzmikroskop besteht darin, dass die Ausleuchtung des Sichtfeldes gleichmäßig ist, die Abbildung klar ist und die Fluoreszenz umso stärker ist, je größer die Vergrößerung ist.
So verwenden Sie ein Fluoreszenzmikroskop
1. Schalten Sie die Lichtquelle ein und die Ultrahochdruck-Quecksilberlampe muss sich einige Minuten lang aufwärmen, um den hellsten Punkt zu erreichen.
2. Das Transmissionsfluoreszenzmikroskop muss den erforderlichen Anregungsfilter zwischen der Lichtquelle und dem Kondensor und den entsprechenden Sperrfilter hinter der Objektivlinse installieren. Bei Epi-Fluoreszenzmikroskopen müssen die erforderlichen Anregungsfilter/Zweifarben-Strahlteiler/Sperrfiltereinsätze in die Schlitze im Strahlengang eingesetzt werden.
3. Beobachten Sie mit einem Objektiv mit geringer Vergrößerung und stellen Sie die Mitte der Lichtquelle entsprechend der Einstellvorrichtung verschiedener Modelle von Fluoreszenzmikroskopen so ein, dass sie sich in der Mitte des gesamten Beleuchtungsflecks befindet.
4. Platzieren Sie das Probenstück und beobachten Sie es nach der Fokussierung. Bei der Verwendung ist Folgendes zu beachten: Beobachten Sie nicht direkt mit dem Endfilter, um keine Augenschäden zu verursachen. Bei der Beobachtung von Proben mit einer Öllinse müssen Sie eine spezielle Öllinse ohne Fluoreszenz verwenden; Nachdem die Hochdruck-Quecksilberlampe ausgeschaltet wurde, kann sie nicht sofort wieder eingeschaltet werden und muss getestet werden. Es kann nach 5 Minuten neu gestartet werden, da es sonst instabil wird und die Lebensdauer der Quecksilberlampe beeinträchtigt.
