Das Prinzip und die Strukturmerkmale der Fluoreszenzmikroskopie
Bei der Fluoreszenzmikroskopie wird ein Punkt mit hoher Lichtausbeute verwendet, um eine bestimmte Wellenlänge von Licht (z. B. ultraviolettes Licht 3650 Zoll oder violett-blaues Licht 4200 Zoll) durch ein Farbfiltersystem als Anregungslicht zu emittieren, und regt die fluoreszierenden Substanzen in der Probe an, verschiedene zu emittieren Farben der Fluoreszenz. Anschließend erfolgt die Beobachtung durch Vergrößerung des Objektivs und des Okulars. Auf diese Weise ist es auch bei sehr schwacher Fluoreszenz vor einem starken Hintergrund mit hoher Empfindlichkeit leicht zu erkennen. Es wird hauptsächlich zur Untersuchung der Zellstruktur und -funktion sowie der chemischen Zusammensetzung verwendet. Der Grundaufbau eines Fluoreszenzmikroskops besteht aus einem gewöhnlichen optischen Mikroskop und Zubehör wie einer Fluoreszenzlichtquelle, einem Anregungsfilter, einem dichroitischen Strahlteiler und einem Sperrfilter. Fluoreszenzlichtquellen verwenden im Allgemeinen Ultrahochdruck-Quecksilberlampen (50-200W), die Licht verschiedener Wellenlängen emittieren können. Allerdings hat jede fluoreszierende Substanz eine Anregungslichtwellenlänge, die die stärkste Fluoreszenz erzeugt, daher müssen Anregungsfilter (typischerweise ultraviolette, violette, blaue und grüne Anregungsfilter) hinzugefügt werden, damit nur eine bestimmte Wellenlänge des Anregungslichts eindringen und sie bestrahlen kann Probe, während alles andere Licht absorbiert wird. Nach der Bestrahlung mit Anregungslicht emittiert jede Substanz in sehr kurzer Zeit sichtbare Fluoreszenz, die länger als die Bestrahlungswellenlänge ist. Fluoreszenz ist spezifisch und im Allgemeinen schwächer als Anregungslicht. Um spezifische Fluoreszenz zu beobachten, ist es notwendig, hinter der Objektivlinse eine Blockierung (oder Unterdrückung) hinzuzufügen und diese in Kombination zu verwenden.
Unterschied zwischen Fluoreszenzmikroskop und gewöhnlichem Mikroskop
1. Bei der Beleuchtungsmethode handelt es sich üblicherweise um einen fallenden Strahltyp, bei dem die Lichtquelle durch eine Objektivlinse auf die Probe projiziert wird.
2. Die Lichtquelle ist ultraviolettes Licht mit einer kürzeren Wellenlänge und höherer Auflösung als gewöhnliche Mikroskope.
3. Es gibt zwei spezielle Filter: Der vor der Lichtquelle dient zum Herausfiltern von sichtbarem Licht und der zwischen dem Okular und der Objektivlinse dient zum Herausfiltern von ultravioletten Strahlen zum Schutz des menschlichen Auges.
Auch die Fluoreszenzmikroskopie ist eine Form der optischen Mikroskopie, wobei der Hauptunterschied in den unterschiedlichen Anregungswellenlängen besteht. Dies bestimmt die Unterschiede in Struktur und Verwendung zwischen Fluoreszenzmikroskopie und gewöhnlicher optischer Mikroskopie.
Die Fluoreszenzmikroskopie ist ein grundlegendes Werkzeug für die Immunfluoreszenzzytochemie. Es besteht aus Hauptkomponenten wie einer Lichtquelle, einem Filterplattensystem und einem optischen System. Es nutzt eine bestimmte Wellenlänge des Lichts, um die Probe zur Emission von Fluoreszenz anzuregen, und vergrößert es durch ein Objektiv- und Okularsystem, um das Fluoreszenzbild der Probe zu beobachten.
