Der Unterschied zwischen Fluoreszenz- und Laser-Konfokalmikroskopie
Fluoreszenzmikroskop
1. Das Fluoreszenzmikroskop ist ein Gerät, das ultraviolettes Licht als Lichtquelle verwendet, um das zu testende Objekt zu beleuchten, wodurch es Fluoreszenz aussendet und dann die Form und Position des Objekts unter dem Mikroskop beobachtet. Mithilfe der Fluoreszenzmikroskopie werden die Absorption, der Transport, die Verteilung und die Lokalisierung von Substanzen innerhalb von Zellen untersucht. Einige Substanzen in Zellen, wie zum Beispiel Chlorophyll, können Fluoreszenz abgeben, nachdem sie ultravioletter Strahlung ausgesetzt wurden; Einige Substanzen selbst emittieren möglicherweise keine Fluoreszenz, können aber bei Anfärbung mit Fluoreszenzfarbstoffen oder fluoreszierenden Antikörpern auch unter ultravioletter Strahlung Fluoreszenz emittieren. Die Fluoreszenzmikroskopie ist eines der Instrumente zur qualitativen und quantitativen Erforschung dieser Substanzen.
2. Prinzip des Fluoreszenzmikroskops:
(A) Lichtquelle: Die Lichtquelle emittiert Licht verschiedener Wellenlängen (von Ultraviolett bis Infrarot).
(B) Anregungsfilter-Lichtquelle: Sie lässt Licht einer bestimmten Wellenlänge durch, die in der Probe Fluoreszenz erzeugen kann, während sie Licht blockiert, das für die Anregungsfluoreszenz unbrauchbar ist.
(C) Fluoreszierende Proben: im Allgemeinen mit fluoreszierenden Pigmenten gefärbt.
(D) Sperrfilter: Lässt Fluoreszenz selektiv durch, indem er Anregungslicht blockiert, das nicht von der Probe absorbiert wurde. Einige Wellenlängen werden auch in der Fluoreszenz selektiv durchgelassen. Ein Mikroskop, das ultraviolettes Licht als Lichtquelle verwendet, um Fluoreszenz vom bestrahlten Objekt auszusenden. Das Elektronenmikroskop wurde erstmals 1931 von Knorr und Harroska in Berlin, Deutschland, zusammengebaut. Dieser Mikroskoptyp verwendet einen Hochgeschwindigkeitselektronenstrahl anstelle eines Lichtstrahls. Aufgrund der viel kürzeren Wellenlänge des Elektronenflusses im Vergleich zu Lichtwellen kann die Vergrößerung des Elektronenmikroskops das 800000-fache erreichen, bei einer minimalen Auflösungsgrenze von 0,2 Nanometern. Mit dem Rasterelektronenmikroskop, das seit 1963 zum Einsatz kommt, können Menschen winzige Strukturen auf der Oberfläche von Objekten erkennen.
3. Anwendungsbereich: Wird zum Vergrößern von Bildern kleiner Objekte verwendet. Wird im Allgemeinen zur Beobachtung von Biologie, Medizin, mikroskopischen Partikeln usw. verwendet.
Konfokales Mikroskop
1. Ein konfokales Mikroskop fügt dem reflektierten Lichtweg eine halbreflektierende Linse hinzu, die das reflektierte Licht, das bereits durch die Linse gelaufen ist, in andere Richtungen beugt. Es gibt eine Schallwand mit einem Loch im Brennpunkt, und das kleine Loch befindet sich im Brennpunkt. Hinter der Schallwand befindet sich eine Photomultiplierröhre. Man kann sich vorstellen, dass das reflektierte Licht vor und nach dem Brennpunkt des Detektionslichts durch dieses konfokale System nicht auf das kleine Loch fokussiert werden kann und durch die Schallwand blockiert wird. Das Photometer misst also die Intensität des reflektierten Lichts im Brennpunkt.
2. Prinzip: Herkömmliche optische Mikroskope verwenden Feldlichtquellen und das Bild jedes Punktes auf der Probe wird durch Beugung oder Streulicht von benachbarten Punkten beeinflusst; Das konfokale Laser-Scanning-Mikroskop verwendet einen Laserstrahl, um durch eine beleuchtete Lochblende eine Punktlichtquelle zu bilden, um jeden Punkt in der Brennebene der Probe abzutasten. Der beleuchtete Punkt auf der Probe wird am Detektionsloch abgebildet und Punkt für Punkt oder Linie von einer Photovervielfacherröhre (PMT) oder einem thermoelektrischen Kopplungsgerät (cCCD) nach dem Detektionsloch empfangen, wodurch schnell ein fluoreszierendes Bild auf dem Computermonitor entsteht Bildschirm. Die Beleuchtungslochblende und die Detektionslochblende sind relativ zur Brennebene der Objektivlinse konjugiert. Die Punkte auf der Brennebene werden gleichzeitig auf die Beleuchtungslochblende und die Emissionslochblende fokussiert, und Punkte außerhalb der Brennebene werden nicht auf die Detektionslochblende abgebildet. Dadurch entsteht ein konfokales Bild, das den optischen Querschnitt der Probe darstellt, wodurch der Nachteil unscharfer Bilder bei der herkömmlichen Mikroskopie überwunden wird.
3. Anwendungsgebiete: Medizin, Tier- und Pflanzenforschung, Biochemie, Bakteriologie, Zellbiologie, Gewebe und Embryo, Lebensmittelwissenschaft, Genetik, Pharmakologie, Physiologie, Optik, Pathologie, Botanik, Neurowissenschaften, Meeresbiologie, Materialwissenschaften, Elektronikwissenschaften, Mechanik, Erdölgeologie und Mineralogie.
