Verwendung und Vorsichtsmaßnahmen des Stereofluoreszenzmikroskops
Anweisungen:
(1) Legen Sie die Materialplatte auf die Bühne.
(2) Schalten Sie den Spannungsstabilisator des Fluoreszenzmikroskops ein. Drücken Sie dann die Startgruppe, um die UV-Lampe zu zünden und schalten Sie sie nicht innerhalb von 15 Minuten aus und starten Sie sie nicht innerhalb von 3 Minuten nach dem Ausschalten erneut.
(3) Drehen Sie den Anregungsfilter auf v, den Farbtrennfilter auf v und wählen Sie einen 495- oder 475-nm-Sperrfilter.
(4) Wählen Sie für die mikroskopische Untersuchung das Fluoreszenzobjektivmikroskop uvFL40 und uvFL100.
(5) Geben Sie nicht fluoreszierendes Öl auf den Objektträger, verwenden Sie zuerst 40 x und verwenden Sie dann zur Überprüfung ein 100 x Fokussierungsmikroskop. Fluoreszenz tritt auf.
(7) Da die Fluoreszenz fluoreszierender Substanzen mit der Zeit allmählich schwächer wird, wenn sie mit ultraviolettem Licht bestrahlt werden, sollte das Sichtfeld während der mikroskopischen Untersuchung häufig gewechselt werden.
(8) uvFL10- oder uvFL20-Mikroskope mit geringer Vergrößerung können auch zur Materialinspektion verwendet werden (bei Verwendung von Objektiven mit geringer Leistung wird kein fluoreszierendes Öl hinzugefügt).
Aufnahmemethode des Fluoreszenzbildes:
Das vom Fluoreszenzmikroskop gesehene Fluoreszenzbild weist sowohl morphologische Eigenschaften als auch Fluoreszenzfarbe und -helligkeit auf. Bei der Beurteilung der Ergebnisse müssen beide Aspekte für eine umfassende Beurteilung kombiniert werden. Die Ergebnisse werden auf der Grundlage subjektiver Indikatoren, also der visuellen Beobachtung durch die Arbeiter, erfasst. Als allgemeine qualitative Beobachtung grundsätzlich zuverlässig. Mit der Entwicklung von Technologie und Wissenschaft werden objektive Indikatoren in unterschiedlichem Maße zur Aufzeichnung von Beurteilungsergebnissen verwendet, beispielsweise Zellspektrophotometer, Bildanalysatoren und andere Instrumente. Allerdings müssen die mit diesen Instrumenten erfassten Ergebnisse auch mit subjektiven Urteilen kombiniert werden.
Für die Aufnahme von Fluoreszenzbildern ist die Fluoreszenzmikroskopfotografie unbedingt erforderlich. Da die Fluoreszenz leicht verblasst und schwächer wird, ist es notwendig, die Ergebnisse in Echtzeit aufzuzeichnen. Die Methode ist grundsätzlich die gleiche wie bei der gewöhnlichen Mikrofotografie. Sie müssen lediglich einen lichtempfindlichen Hochgeschwindigkeitsfilm wie ASA200 oder höher oder 24 verwenden. Da ultraviolettes Licht einen starken Einfluss auf die Fluoreszenzlöschung hat, wie beispielsweise bei FITC-Markern, nimmt die Fluoreszenzhelligkeit um 50 Prozent ab, wenn es 30 Sekunden lang mit ultraviolettem Licht bestrahlt wird. Wenn die Belichtungsgeschwindigkeit zu langsam ist, kann daher kein Fluoreszenzbild aufgenommen werden. Allgemeine Forschungsfluoreszenzmikroskope verfügen über halbautomatische oder vollautomatische Mikrofotografiesystemgeräte.
Vorsichtsmaßnahmen:
(1) Halten Sie sich strikt an die Anforderungen der Werksanweisungen des Fluoreszenzmikroskops und ändern Sie das Programm nicht nach Belieben.
(2) Die Inspektion sollte in einem dunklen Raum durchgeführt werden. Nachdem Sie die Dunkelkammer betreten haben, schließen Sie die Stromversorgung an und zünden Sie die Ultrahochdruck-Quecksilberlampe 5-15 Minuten lang an. Nachdem das starke Licht der Lichtquelle stabil ist, gewöhnen sich die Augen vollständig an die Dunkelkammer und beginnen dann mit der Beobachtung der Probe.
(3) Um zu verhindern, dass ultraviolette Strahlen die Augen schädigen, sollte beim Einstellen der Lichtquelle eine Schutzbrille getragen werden.
(4) Die Inspektionszeit beträgt jeweils vorzugsweise 1-2 Stunden. Wenn sie 90 Minuten überschreitet, nimmt die Lichtstärke der Ultrahochdruck-Quecksilberlampe allmählich ab und die Fluoreszenz wird schwächer; Nachdem die Probe 3-5 Minuten lang mit ultravioletten Strahlen bestrahlt wurde, wird auch die Fluoreszenz deutlich abgeschwächt; daher sollte sie höchstens 2-2 Stunden nicht überschreiten. 3h.
(5) Die Lebensdauer der Lichtquelle des Fluoreszenzmikroskops ist begrenzt, und die Proben sollten gemeinsam untersucht werden, um Zeit zu sparen und die Lichtquelle zu schützen. Bei heißem Wetter sollten Ventilatoren hinzugefügt werden, um die Wärme abzuleiten, und die neuen Glühbirnen sollten ab Beginn ihrer Nutzungsdauer erfasst werden. Wenn Sie die Lampe wieder verwenden möchten, nachdem die Lampe erloschen ist, müssen Sie warten, bis die Glühbirne ausreichend abgekühlt ist, bevor Sie sie anzünden. Vermeiden Sie es, die Lichtquelle mehrmals täglich anzuzünden.
(6) Beobachten Sie die Probe unmittelbar nach dem Färben, da die Fluoreszenz mit der Zeit allmählich schwächer wird. Wenn die Probe in einem Polyethylen-Plastikbeutel bei 4 Grad gelagert wird, kann die Zeit der Fluoreszenzabschwächung verzögert und das Verdunsten des Eindeckmittels verhindert werden.
(7) Beurteilungsmaßstab für die Fluoreszenzhelligkeit: Sie wird im Allgemeinen in vier Stufen unterteilt, d. h. „eins“ – keine oder nur schwache Fluoreszenz ist erkennbar. „plus“ – Es ist nur deutlich sichtbare Fluoreszenz zu sehen. „ plus plus „ – Sichtbar und hell
