Anforderungen an die Herstellung von Fluoreszenzmikroskop-Präparaten
(1) Objektträger aus Glas
Die Dicke des Objektträgers sollte zwischen 0,8 und 1,2 mm liegen. Ist der Objektträger zu dick, absorbiert er einerseits mehr Licht und kann andererseits nicht dazu führen, dass sich Anregungslicht auf der Probe sammelt. Der Objektträger muss glatt, gleichmäßig dick und frei von offensichtlicher spontaner Fluoreszenz sein. Manchmal werden Objektträger aus Quarzglas benötigt.
(2) Glasobjektträger abdecken
Die Dicke des Deckglases beträgt etwa 0,17 mm, was glatt und sauber ist. Um die Anregung zu verstärken, können auch Interferenzdeckgläser verwendet werden. Hierbei handelt es sich um ein speziell entwickeltes Deckglas mit mehreren Schichten von Substanzen (z. B. Magnesiumfluorid), die bei verschiedenen Lichtwellenlängen unterschiedliche Interferenzeffekte haben. Dadurch kann die Fluoreszenz reibungslos passieren, während die Reflexionsanregung die Probe anregen kann.
(3) Probe
Gewebeschnitte oder andere Proben sollten nicht zu dick sein, da das Anregungslicht größtenteils im unteren Teil der Probe verbraucht wird, während der obere Teil, der direkt von der Objektivlinse beobachtet wird, nicht vollständig angeregt wird. Darüber hinaus können Zellüberlappungen oder die Maskierung von Verunreinigungen die Beurteilung beeinträchtigen.
(4) Dichtungsmittel
Glycerin wird üblicherweise als Bindemittel verwendet und muss frei von spontaner Fluoreszenz, farblos und transparent sein. Die Helligkeit der Fluoreszenz ist bei pH 8,5 bis 9,5 heller und es ist nicht einfach, schnell zu verblassen. Daher wird üblicherweise eine gleiche Mischung aus Glycerin und 0,5 mol/l Carbonatpuffer bei pH 9,0-9,5 als Versiegelungsmittel verwendet.
(5) Spiegelöl
Bei der Beobachtung von Proben mit einem Dunkelfeld-Fluoreszenzmikroskop und einem Ölmikroskop ist die Verwendung von Linsenöl erforderlich. Verwenden Sie am besten ein speziell hergestelltes, nicht fluoreszierendes Linsenöl, das wie oben erwähnt auch durch Glycerin ersetzt werden kann. Auch flüssiges Paraffin kann verwendet werden, allerdings ist der Brechungsindex niedrig und hat einen leichten Einfluss auf die Bildqualität.
Vorsichtsmaßnahmen für die Verwendung eines Fluoreszenzmikroskops
(1) Befolgen Sie strikt die Anforderungen des Werkshandbuchs des Fluoreszenzmikroskops und ändern Sie das Programm nicht willkürlich.
(2) Die Inspektion sollte in einem dunklen Raum durchgeführt werden. Nachdem Sie die Dunkelkammer betreten haben, schließen Sie die Stromversorgung an und zünden Sie die Ultrahochdruck-Quecksilberlampe 5 bis 15 Minuten lang an. Nachdem die Lichtquelle starkes Licht abgegeben und sich stabilisiert hat, gewöhnen sich die Augen vollständig an die Dunkelkammer, bevor sie mit der Beobachtung der Probe beginnen.
(3) Um UV-Schäden an den Augen zu vermeiden, sollte beim Einstellen der Lichtquelle eine Schutzbrille getragen werden.
(4) Die Inspektionszeit sollte jedes Mal 1-2 Stunden betragen. Wenn sie 90 Minuten überschreitet, nimmt die Lichtstärke der Ultrahochdruck-Quecksilberlampe allmählich ab und die Fluoreszenz wird schwächer; Nachdem die Probe 3-5 Minuten lang ultravioletter Strahlung ausgesetzt war, nahm auch die Fluoreszenz der Probe deutlich ab; Daher sollte die Dauer höchstens 2-3 Stunden betragen.
(5) Die Lebensdauer der Lichtquelle des Fluoreszenzmikroskops ist begrenzt und die Probe sollte zentral untersucht werden, um Zeit zu sparen und die Lichtquelle zu schützen. Bei heißem Wetter sollte ein elektrischer Ventilator eingebaut werden, um die Wärme abzuleiten und abzukühlen. Beim Austausch einer neuen Glühbirne sollte die Nutzungsdauer von Beginn an erfasst werden. Wenn die Lampe ausgeschaltet ist und wieder verwendet werden soll, muss sie warten, bis die Glühbirne vollständig abgekühlt ist, bevor sie gezündet wird. Vermeiden Sie es, die Lichtquelle mehrmals zu zünden.
(6) Beobachten Sie die Probe unmittelbar nach dem Färben, da die Fluoreszenz mit der Zeit allmählich abnimmt. Wenn die Probe in einem Polyethylen-Plastikbeutel bei 4 Grad gelagert wird, kann dies die Fluoreszenzabschwächungszeit verzögern und die Verdunstung des Einbettmittels verhindern.
(7) Der Beurteilungsstandard für die Fluoreszenzhelligkeit ist im Allgemeinen in vier Stufen unterteilt, nämlich „eins“ – keine oder sichtbare schwache Fluoreszenz. Plus: Es ist nur deutlich sichtbare Fluoreszenz zu erkennen. plus plus – Sichtbar mit heller Fluoreszenz. ' plus plus plus ' - Sichtbare und blendende Fluoreszenz.
