Vorbereitung und Beobachtung biologischer Proben für Elektronenmikroskope
Die Auflösung eines Mikroskops hängt von der Wellenlänge des verwendeten Lichts ab. Das 1933 auf den Markt gekommene Elektronenmikroskop erreichte eine deutlich höhere Auflösung als ein optisches Mikroskop, da es als Lichtquellen Elektronenstrahlen mit deutlich kürzeren Wellenlängen als sichtbares Licht verwendete. Die verschiedenen Lichtquellen bestimmen auch eine Reihe von Unterschieden zwischen Elektronenmikroskopen und optischen Mikroskopen.
Basierend auf den Unterschieden in den Prinzipien der Elektronenstrahl-Bildgebung und der Art und Weise, wie sie auf Proben wirken, haben sich moderne Elektronenmikroskope in viele Arten entwickelt. Derzeit werden am häufigsten Transmissionselektronenmikroskope und Rasterelektronenmikroskope verwendet. Ersteres hat eine Gesamtvergrößerung, die zwischen dem 1000- und 10000000-fachen variieren kann, während letztere eine Gesamtvergrößerung hat, die zwischen dem 20- und 300000-fachen variieren kann. In diesem Experiment wird hauptsächlich die Vorbereitung von zwei Arten von Mikroskopproben vorgestellt: Transmissionselektronenmikroskopie und Rasterelektronenmikroskopie.
2, Ausrüstung
1. Der Stamm Escherichia coli ist geneigt.
2. Lösung oder Reagenz: Pentylacetat, konzentrierte Schwefelsäure, wasserfreies Ethanol, steriles Wasser, 2 % wässrige Natriumphosphowolframatlösung (pH 6,5–8,0), 0,3 % Polyvinylformaldehydlösung (gelöst in Chloroform), Cytochrom C, Ammoniumacetat, Plasmid pBR322.
3. Zu den Instrumenten oder anderen Werkzeugen gehören gewöhnliche optische Mikroskope, Kupfernetze, Porzellantrichter, Becher, Petrischalen, sterile Tropfer, sterile Pinzetten, Stifte, Glasobjektträger, Zählplatten, Vakuumbeschichtungsmaschinen, Trockner für kritische Punkte usw.
3, Betriebsschritte
(1) Vorbereitung und Beobachtung von Proben für die Transmissionselektronenmikroskopie
1. Behandlung von Metallgewebe
Die Probe eines optischen Mikroskops wird zur Beobachtung auf einen Glasobjektträger gelegt. Da jedoch bei einem Transmissionsspiegel Elektronen nicht in die Glasscheibe eindringen können, kann ein Netzmaterial nur als Träger verwendet werden, üblicherweise als Trägernetz bezeichnet. Das Trägernetz kann aufgrund unterschiedlicher Materialien und Formen in verschiedene Spezifikationen unterteilt werden, wobei üblicherweise Kupfernetze mit 200–400 Maschen (Anzahl der Löcher) verwendet werden. Kupfergewebe sollte vor der Verwendung behandelt werden, um jeglichen Schmutz zu entfernen und es sauber zu halten, da es sonst die Qualität des Trägerfilms und die Klarheit der Musterfotos beeinträchtigt. Das in diesem Experiment verwendete 400-Mesh-Kupfernetz kann mit der folgenden Methode behandelt werden: Zuerst einige Stunden lang mit Pentylacetat einweichen und schwimmen lassen, dann mehrmals mit destilliertem Wasser spülen und schließlich das Kupfernetz zur Dehydrierung in wasserfreies Ethanol eintauchen und schwimmen lassen. Wenn das Kupfernetz nach den oben genannten Methoden immer noch nicht sauber ist, kann es 1–2 Minuten lang in verdünnter konzentrierter Schwefelsäure (1:1) eingeweicht oder einige Minuten lang in 1 %iger NaOH-Lösung gekocht, mehrmals mit destilliertem Wasser gespült und dann zur späteren Verwendung in wasserfreiem Ethanol dehydriert werden.
