Messung des Gewebeblockvolumens mit biologischen Mikroskopen
Bisher sind Kryofixierung, gefrorene Ultradünnschnitte und Gefriertrocknung Routinemethoden für die Röntgenmikroskopie von Gewebe und Zellen. Bitte machen Sie folgende Angaben zu dieser Methode:
Ein biologisches Mikroskop mit einem Scheinwerfer kann den Scheinwerfer nach oben und unten bewegen, um eine mäßige Helligkeit zu erreichen, und die Blende der variablen Blende kann auch geändert werden, um eine mäßige Helligkeit zu erreichen. Kommt das Licht von der Sonne, kann der Strahler entsprechend angehoben und die Apertur des variablen Lichts entsprechend vergrößert werden. Wenn das Licht zu stark ist, kann der Scheinwerfer entsprechend abgesenkt und die Blende der Kreuzung entsprechend verkleinert werden. Wenn Sie in dieser Situation immer noch das Gefühl haben, geblendet zu werden, können Sie einen entsprechenden Filter an der Halterung unter dem Scheinwerfer anbringen. Diese Eiche kann eine Helligkeit erreichen, die Sie zufriedenstellt. Natürlich kann durch Anpassen der oberen und unteren Position des Scheinwerfers die Blendengröße des Lichtmesswerts geändert und geeignete Filter ausgewählt werden, was eine gewisse Zeit an Übung und Erfahrung erfordert.
Ein sehr wichtiges Thema in der biologischen Mikroskopie ist der Prozess der Probenentnahme und Isolierung von Zellen. Nach der Gefriertrocknung und der Harzeinbettung (FD) müssen die gefrorenen ultradünnen Abschnitte sorgfältig verarbeitet werden, um sicherzustellen, dass der 65-Elemente-Gehalt jedes Teils während der Beobachtung und Analyse nicht beschädigt wird. Aufgrund der zahlreichen Schritte und hohen Kosten, die mit der Röntgenmikroanalyse verbunden sind, ist es bedauerlich, falsche Schlussfolgerungen zu ziehen, wenn die analysierten Zellen nach längerer und mehrstufiger Verarbeitung beschädigt oder abgestorben sind. Die durch Gelatinase-Behandlung abgetrennten Myokardzellen haben zwei Formen, eine ist langstabförmig und die andere kreisförmig. Letzteres bezieht sich auf sterbende Zellen, die während des Prozesses der Zelltrennung beschädigt werden.
Der Gehalt und die Verteilung der Elektrolyte in diesen beiden Zelltypen sind unter dem biologischen Mikroskop sehr unterschiedlich. In kreisförmigen Kardiomyozyten ist Na sehr hoch und K extrem niedrig, und die Konzentration von Ca in linearen Dendriten ist sehr hoch. Nach Überprüfung mit anderen Analysemethoden wurde nachgewiesen, dass der hohe Na- und niedrige K-Gehalt in zirkulären Zellen sowie der hohe Ca-Gehalt in Mitochondrien das Ergebnis einer Membranschädigung während der Zelltrennung sind. Bei der Kaltfixierung von Zellen und Geweben werden diese häufig zunächst abgeschreckt und anschließend in flüssigem Stickstoff gelagert. Für die Konservierungswirkung ist die Abschreckfixierung entscheidend. Lebende Zellen oder frische Gewebe sind reich an Wasser, und beim Abschrecken werden die Teile der Zellen oder Gewebe, die in direkten Kontakt mit dem Kältemittel kommen (insbesondere bei Verwendung von flüssigem Stickstoff zum Kühlen), oft zuerst gefroren und fixiert, wodurch eine „Hülle“ entsteht, die verhindert, dass der zentrale Teil der Zellen zerdrückt und fixiert wird. Daher wird bei der Durchführung von Röntgenmikroanalysen häufig festgestellt, dass sich im zentralen Teil größerer Zellen Eiskristalle befinden. Um dies zu verhindern, wird als Kältemittel ein Stoff verwendet, dessen Schmelzpunkt höher als der von flüssigem Stickstoff, aber um 806 °C niedriger ist. Es gibt viele dieser Substanzen, aber sie sind leicht zu bekommen und das erschwinglichste ist konzentriertes Propan (Siedepunkt 42,120 °C, Schmelzpunkt 187,10 °C, Molekulargewicht 44,1), das auch eine schnelle Abkühlgeschwindigkeit aufweist. Sein Nachteil ist jedoch, dass es brennbar ist.
