Einführung in die verbesserten Vorteile der Laser -Scan -Multiphoton -Mikroskopie
Das Laser-Scan-Multiphoton-Mikroskop ist eine signifikante Verbesserung der optischen Mikroskopie, die sich hauptsächlich in der Fähigkeit manifestiert, tiefe Strukturen lebender Zellen, fixierter Zellen und Gewebe zu beobachten und klare und scharfe multischichtige Z-Ebenen-Strukturen von Z-Ebenen, nämlich optische Schnitte, zu konstruieren, die drei-diminale feste Strukturen von Spekplatten konstruieren können. Das konfokale Mikroskop verwendet eine Laserlichtquelle, die erweitert wird, um die gesamte Fokusebene der objektiven Linse zu füllen, und dann durch das Linsensystem der objektiven Linse in sehr kleine Punkte auf der Fokusebene der Probe konvergiert. Nach der numerischen Blende der objektiven Linse beträgt der Durchmesser des hellen Beleuchtungspunkts ungefähr 0. 25-0. 8 μm, und die Tiefe beträgt ungefähr 0. 5-1. 5 μm. Die Größe des konfokalen Punktes wird durch das Mikroskopdesign, die Laserwellenlänge, die objektiven Eigenschaften, die Einstellungen des Scan -Einheitszustands und die Probeneigenschaften bestimmt. Der Beleuchtungsbereich und die Tiefe eines Feldmikroskops sind groß, während sich die Beleuchtung eines konfokalen Mikroskops auf einen Schwerpunkt auf der Fokusebene konzentriert. Der grundlegende Vorteil der konfokalen Mikroskopie besteht darin, dass sie feine optische Schnitte an dicken fluoreszierenden Proben (bis zu 5 0 μm oder mehr) mit einer Dicke von ungefähr 0,5 bis 1,5 μm durchführen kann. Die Reihe von optischen Scheibenbildern kann erhalten werden, indem die Probe unter Verwendung des Z-Achse-Steppermotors des Mikroskops nach oben und unten bewegt wird. Die Sammlung von Bildinformationen wird innerhalb der * * -Ebene gesteuert, ohne dass Signale von anderen Positionen auf der Probe gestört werden. Nachdem der Einfluss der Hintergrundfluoreszenz entfernt und das Signal-Rausch-Verhältnis erhöht wird, werden der Kontrast und die Auflösung konfokaler Bilder im Vergleich zu herkömmlichen Fluoreszenzbildern der Feldbeleuchtung signifikant verbessert. In vielen Exemplaren können komplizierte strukturelle Komponenten zu komplexen Systemen bilden. Sobald jedoch genügend optische Abschnitte gesammelt werden können, können wir sie in drei Dimensionen rekonstruieren. Diese experimentelle Methode wurde in der biologischen Forschung häufig verwendet, um die komplexen strukturellen und funktionellen Beziehungen zwischen Zellen oder Geweben aufzuklären.
