Wie können Sie das richtige konfokale Mikroskop für sich auswählen? Gibt es eine bestimmte Methode?
Die konfokale Mikroskopie hat mehr Vorteile als die Weitfeldmikroskopie. Die konfokale Mikroskopie kann kontinuierliche optische Schnitte von Proben durchführen und Signalinterferenzen von nicht-fokalen Ebenen ausschließen. Aus diesem Grund ist die Anwendung der konfokalen Mikroskopie tatsächlich weiter verbreitet. Es gibt jedoch immer mehr konfokale Mikroskope auf dem Markt. Wie man wählt?
Die konfokale Mikroskopie hat mehr Vorteile als die Weitfeldmikroskopie. Die konfokale Mikroskopie kann kontinuierliche optische Schnitte von Proben machen und Signalinterferenzen von nicht-fokalen Ebenen ausschließen. Aus diesem Grund ist die konfokale Mikroskopie tatsächlich weiter verbreitet. Es gibt jedoch immer mehr konfokale Mikroskope auf dem Markt. Wie man wählt? Bei der Auswahl eines konfokalen Mikroskops gibt es zwei grundlegende und wichtige Überlegungen: die Art der Probe, die Sie untersuchen möchten (z. B. fixierte oder lebende Zellen), und die Art des Assays, den Sie durchführen möchten (z. B. statische oder dynamische zelluläre Prozesse).
Konfokale Bildgebung fixierter Zellen
Um fixierte und gefärbte Zellen oder Gewebe abzubilden, wählen wir im Allgemeinen konfokales Laserscanning (LSCM). Dies liegt hauptsächlich daran, dass fixierten toten Zellen schnelle biologische Ereignisse in lebenden Zellen fehlen und sie besser von der höheren räumlichen Auflösung von LSCM profitieren können. Bei der LSCM-Bildgebung wird die Probe optisch mit einem Laser geschnitten, und die Scangeschwindigkeit (abhängig von der Geschwindigkeit des Scan-Array-Spiegels) beträgt im Allgemeinen 1 fps. Längere Belichtungszeiten bedeuten ein größeres Risiko des Photobleichens, aber für fixierte tote Zellen ist die Zeit nicht kritisch und wir können sie mitteln, indem wir mehrere Bilder aufnehmen.
Konfokale Bildgebung lebender Zellen
Die Bildgebung lebender Zellen erfordert zusätzlichen Schutz vor unfreundlichen Umgebungen. Bei der Bildgebung ist unsere erste Überlegung, die Lebensfähigkeit und Gesundheit der Zellen zu erhalten. Heizelemente mit konstanter Temperatur und Perfusionssysteme sind unerlässlich, insbesondere für Zeitrafferstudien. Die schnellen biochemischen Ereignisse, die den physiologischen Zustand lebender Zellen kontrollieren, sind das, was die meisten Menschen studieren möchten, aber diese Ereignisse sind zu schnell für herkömmliche LSCM. Darüber hinaus induzierte eine längere Exposition gegenüber LSCM auch eine Schädigung der Zellen durch toxisches Licht. Daher erfordert die Abbildung lebender Zellen spezielle konfokale Mikroskope.
Es gibt im Allgemeinen zwei Optionen für die konfokale Bildgebung lebender Zellen: schnell scannende Laserscanning-Konfokale und Spinning-Disk-Konfokale. Die schnelle konfokale Scanning-Mikroskopie ersetzt langsamere Galvanometerspiegel durch schnellere resonante Scanning-Spiegel und ermöglicht Scangeschwindigkeiten von bis zu 30 fps; Während Spinning Disk Confocals (SDCMs) den Vorteil eines schnelleren Scannens haben (obwohl zwangsläufig mit einem Verlust an räumlicher Auflösung), kann ihre Geschwindigkeit theoretisch 2000 fps erreichen (in der Praxis wird sie oft durch andere Faktoren begrenzt).
Wenn Sie Bedenken wegen Photobleichung oder eines sehr schwachen Fluoreszenzsignals haben, ist SDCM möglicherweise besser geeignet. SDCM verwendet zwei rotierende Scheiben mit angeordneten Mikrovertiefungen, um das Anregungslicht zu verteilen. Im Gegensatz zu LSCM, das den Probenpunkt scannt, erfasst SDCM mehrere Punkte gleichzeitig (etwa 100 Pixelpunkte), sodass die Geschwindigkeit stark erhöht wird und die Photobleichung von SDCM und weniger Phototoxizität. Sie können jedoch auch schnell scannende Konfokale verwenden, um die Scangeschwindigkeit zu erhöhen, kombiniert mit hochempfindlichen Detektoren, und die Anregungslichtenergie reduzieren, um die Phototoxizität zu reduzieren, wodurch die umfangreichen Funktionen herkömmlicher Konfokale aufrechterhalten werden können.
Automatisiertes konfokales Bildgebungssystem
Einige Forscher suchen gerne nach Möglichkeiten, das Mikroskop an ihre individuellen Bedürfnisse anzupassen. Und manche Forscher interessieren sich gar nicht dafür, wie Mikroskope eigentlich funktionieren. Für letztere dürfte ein automatisiertes konfokales Mikroskop besser sein. Das Olympus FluoViewFV10i ist beispielsweise ein solches vollautomatisches Desktop-4-konfokales Lasermikroskop. Seine kompakte integrierte Struktur benötigt fast keinen Installationsraum. Diese Art von Instrumenten ist ideal für Forscher, die täglich viele Bilddaten erfassen müssen, aber natürlich nicht die Funktionalität und Flexibilität herkömmlicher Konfokalgeräte widerspiegeln. Darüber hinaus ist die NikonA1 auch ein vollautomatisches Konfokalsystem. Wie die meisten herkömmlichen konfokalen Scanmikroskope verwendet das NikonA1 einen Galvanometer-Scankopf, der eine höhere Auflösung als das A1R mit einem Hybrid-Scankopf hat, aber eine etwas langsamere Geschwindigkeit (A1R ~30 fps)
