Haben Sie jemals die Grundprinzipien der Phasenkontrastmikroskopie verstanden?
Das Phasenkontrastmikroskop wurde 1935 vom niederländischen Wissenschaftler Zernike zur Beobachtung ungefärbter Proben erfunden. Bei lebenden Zellen und ungefärbten biologischen Proben ändern sich aufgrund des Unterschieds im Brechungsindex und der Dicke der Mikrostruktur jedes Teils der Zelle beim Durchgang der Lichtwelle nicht die Wellenlänge und die Amplitude, sondern nur die Phase (Amplitudenunterschied). ), das für das menschliche Auge unsichtbar ist. beobachten. Das Phasenkontrastmikroskop verändert die Phasendifferenz und nutzt Lichtbeugungs- und Interferenzphänomene, um die Phasendifferenz in eine Amplitudendifferenz umzuwandeln, um lebende Zellen und ungefärbte Proben zu beobachten. Der Unterschied zwischen einem Phasenkontrastmikroskop und einem gewöhnlichen Mikroskop besteht darin, dass eine Ringblende anstelle einer variablen Blende verwendet wird, eine Objektivlinse mit Phasenplatte anstelle einer gewöhnlichen Objektivlinse verwendet wird und ein Teleskop für die Koaxialität vorgesehen ist.
Grundprinzipien der Phasenkontrastmikroskopie:
Unter Verwendung des Unterschieds im Brechungsindex und der Dicke zwischen verschiedenen Strukturkomponenten des Objekts wird der durch verschiedene Teile des Objekts verlaufende optische Wegunterschied in den Unterschied in der Amplitude (Lichtintensität) umgewandelt und durch die Kondensorlinse mit einer ringförmigen Blende geleitet Phasendifferenz mit einer Phasenplatte Das Objektiv realisiert das Beobachtungsmikroskop. Es wird hauptsächlich zur Beobachtung lebender Zellen oder ungefärbter Gewebeschnitte verwendet, kann aber manchmal auch zur Beobachtung gefärbter Proben ohne Kontrast verwendet werden.
Der optische Wegunterschied des durch die Probe hindurchtretenden sichtbaren Lichts wird in einen Amplitudenunterschied umgewandelt, wodurch der Kontrast zwischen verschiedenen Strukturen verbessert und verschiedene Strukturen deutlich sichtbar gemacht werden. Das Licht wird nach dem Durchgang durch die Probe gebrochen, weicht vom ursprünglichen Strahlengang ab und wird um 1/4λ (Wellenlänge) verzögert. Wenn es um 1/4 λ erhöht oder verringert wird, beträgt der optische Wegunterschied 1/2 λ, und die beiden Strahlen interferieren nach der Lichtachse. Stärken, erhöhen oder verringern Sie die Amplitude und verbessern Sie den Kontrast.
Das Phasenkontrastmikroskop hat zwei Funktionen, die andere Mikroskope nicht haben: ① Es trennt das direkte Licht (Hintergrundlicht im Sichtfeld) von dem vom Objekt gebeugten Licht; ② Es entzieht der Phase etwa die Hälfte der Wellenlänge, sodass es nicht zu einer Wechselwirkung kommen kann, was zu einer Intensitätsänderung führt.
