Methoden und Vorsichtsmaßnahmen bei der Verwendung von Fluoreszenzmikroskopen
Verwendungsmethode:
(1) Legen Sie das Materialblatt auf die Trägerbühne.
(2) Schalten Sie den Spannungsregler des Fluoreszenzmikroskops ein. Drücken Sie dann die Startgruppe, um die UV-Lampe zu zünden. Sie darf 15 Minuten lang nicht ausgeschaltet und nach dem Ausschalten 3 Minuten lang nicht neu gestartet werden.
(3) Stellen Sie den Anregungsfilter auf v und den dichroitischen Film auf v und wählen Sie einen 495- oder 475-nm-Sperrfilter.
(4) Wählen Sie ein Fluoreszenz-Empfangsobjektivmikroskop mit den Linsen uvFL40 oder uvFL100.
(5) Nicht fluoreszierendes Öl auf den Objektträger geben, zunächst unter dem 40-fachen, dann unter dem 100-fachen Fokussierungsmikroskop fokussieren. Fluoreszenz zeigen.
(7) Da die Fluoreszenz des fluoreszierenden Materials durch Ultraviolettbestrahlung mit der Zeit allmählich abnimmt, muss bei mikroskopischen Untersuchungen das Sichtfeld häufig geändert werden.
(8) Es können auch die Mikroskopiematerialien uvFL10 oder uvFL20 mit geringer Vergrößerung verwendet werden (mit geringer Vergrößerung ohne Zusatz von nicht fluoreszierendem Öl).
Fluoreszenzbildaufnahmeverfahren:
Fluoreszenzbild, das mit einem Fluoreszenzmikroskop betrachtet wird. Eins betrifft die morphologischen Merkmale, das andere die Farbe und Helligkeit der Fluoreszenz. Bei der Beurteilung der Ergebnisse müssen beide zu einer umfassenden Beurteilung kombiniert werden. Die Ergebnisse werden anhand subjektiver Indikatoren aufgezeichnet, d. h. durch visuelle Beobachtung durch den Arbeiter. Als allgemeine qualitative Beobachtung grundsätzlich zuverlässig. Mit der Entwicklung von Technologie und Wissenschaft werden in unterschiedlichem Maße objektive Indikatoren verwendet, um die Ergebnisse der Beurteilung aufzuzeichnen, z. B. die Verwendung von Zellspektrophotometern, Bildanalysatoren und anderen Instrumenten. Die von diesen Instrumenten aufgezeichneten Ergebnisse müssen jedoch auch mit subjektiven Beurteilungen kombiniert werden.
Die Fluoreszenzmikroskop-Fotografietechnologie ist für die Aufnahme von Fluoreszenzbildern sehr wichtig, da die Fluoreszenz leicht verblasst und schwächer wird, um die Ergebnisse der Fotografie sofort aufzuzeichnen. Die Methode ist im Grunde die gleiche wie bei der normalen Mikrofotografie. Sie müssen nur einen Hochgeschwindigkeits-Fotofilm wie ASA200 oder 24 verwenden. Da das ultraviolette Licht auf den Fluoreszenz-Burst-Effekt, wie z. B. FITC-Marker, einwirkt, verringert sich die Fluoreszenzhelligkeit bei der Bestrahlung mit ultraviolettem Licht für 30 s um 50 %. Daher ist die Belichtungsgeschwindigkeit zu langsam, um das Fluoreszenzbild aufzunehmen. Allgemeine Forschungsfluoreszenzmikroskope verfügen über halbautomatische oder vollautomatische Mikrofotografiesysteme.
Vorsichtsmaßnahmen:
(1) Befolgen Sie beim Arbeiten strikt die Anforderungen im Herstellerhandbuch des Fluoreszenzmikroskops und ändern Sie die Vorgehensweise nicht willkürlich.
(2) Die Untersuchung sollte in der Dunkelkammer durchgeführt werden. Nach dem Betreten der Dunkelkammer schließen Sie die Stromversorgung an, schalten die Ultrahochdruck-Quecksilberlampe 5-15 Minuten lang ein, warten, bis die Lichtquelle ein starkes Licht ausstrahlt, um sich zu stabilisieren, und die Augen sich vollständig an die Dunkelkammer gewöhnt haben, und beginnen dann mit der Beobachtung der Probe.
(3) Um Augenschäden durch ultraviolettes Licht zu vermeiden, sollte beim Einstellen der Lichtquelle eine Schutzbrille getragen werden.
(4) Die Überprüfung der Zeit sollte jeweils etwa 1 bis 2 Stunden dauern. Nach mehr als 90 Minuten nimmt die Lichtintensität der Ultrahochdruck-Quecksilberlampe allmählich ab und die Fluoreszenz lässt nach. Werden die Proben 3 bis 5 Minuten mit ultraviolettem Licht bestrahlt, lässt die Fluoreszenz ebenfalls deutlich nach. * Die Überprüfung sollte daher 2 bis 3 Stunden nicht überschreiten.
(5) Die Lebensdauer der Lichtquelle eines Fluoreszenzmikroskops ist begrenzt. Um Zeit zu sparen und die Lichtquelle zu schützen, sollten die Proben zentral überprüft werden. Wenn die Lichtquelle heiß ist, sollte ein Lüfter zur Kühlung eingesetzt werden. Die neue Glühbirne sollte vor Beginn der Verwendung ausgetauscht werden. Wenn die Lampe erlischt und wieder verwendet werden soll, muss die Glühbirne vor dem Einschalten ausreichend abgekühlt sein. Die Lichtquelle sollte mehrmals ausgeschaltet werden.
(6) Beobachten Sie die Probe sofort nach dem Färben, da die Fluoreszenz mit der Zeit allmählich nachlässt. Wenn Sie die Probe in einen Polyethylen-Plastikbeutel geben und bei 4 Grad aufbewahren, kann dies den Zeitpunkt des Nachlassens der Fluoreszenz verzögern und das Verdunsten des Versiegelungsmittels verhindern.
(7) Beurteilungskriterien für die Fluoreszenzhelligkeit: im Allgemeinen in vier Stufen unterteilt, d. h., 'eins' - keine oder sichtbare schwache Fluoreszenz. '+' - nur deutlich sichtbare Fluoreszenz. '+ +' - sichtbar mit einer hellen
