Unterschied zwischen Fluoreszenzmikroskop und gewöhnlichem optischen Mikroskop
Der Unterschied zwischen einem Fluoreszenzmikroskop und einem gewöhnlichen optischen Mikroskop besteht darin, dass die Probe nicht durch die Beleuchtung einer gewöhnlichen Lichtquelle beobachtet wird, sondern durch die Verwendung von Licht einer bestimmten Wellenlänge (normalerweise ultraviolett, blau-violett), um das fluoreszierende Material in der Probe unter dem Mikroskop anzuregen, sodass es fluoreszierendes Licht aussendet. Die Rolle der Lichtquelle im Fluoreszenzmikroskop besteht also nicht in der direkten Beleuchtung, sondern in der Stimulation der Fluoreszenz der Probe im Inneren. Die Lichtquelle des Fluoreszenzmikroskops ist keine direkte Beleuchtung, sondern eine Energiequelle, um die fluoreszierende Substanz im Inneren der Probe anzuregen. Der Grund, warum wir die Probe beobachten können, liegt nicht in der Beleuchtung der Lichtquelle, sondern in dem Fluoreszenzphänomen, das durch die fluoreszierende Substanz in der Probe entsteht, nachdem sie die angeregte Lichtenergie absorbiert hat. Es ist ersichtlich, dass die Eigenschaften des Fluoreszenzmikroskops hauptsächlich darin bestehen, dass seine Lichtquelle eine große Anzahl von Anregungslicht in einem bestimmten Wellenlängenbereich liefern kann, sodass die fluoreszierenden Substanzen in der untersuchten Probe die erforderliche Intensität an Anregungslicht erhalten können. Gleichzeitig muss das Fluoreszenzmikroskop über ein entsprechendes Filtersystem verfügen. Das Fluoreszenzmikroskop ist das grundlegende Werkzeug für die **Fluoreszenzhistochemie. Es besteht aus einer Ultrahochdrucklichtquelle, einem Filtersystem (einschließlich Anregungs- und Unterdrückungsfilterplatte), einem optischen System und einem fotografischen System sowie weiteren Hauptkomponenten. Es verwendet eine bestimmte Wellenlänge des Lichts, um die Probe zur Fluoreszenz anzuregen.
1. Methode der Fluoreszenzanregung: Je nach Wellenlängenbereich des Lichts wird zwischen UV-Anregungsmethode (mit ultravioletter Beleuchtung) und BV-Anregungsmethode (mit blauviolettem Licht) unterschieden. Die beiden UV-Anregungsmethoden verwenden zur Anregung Licht mit einer Wellenlänge von weniger als 400 nm im nahen Ultraviolettbereich. Bei dieser Methode gibt es kein sichtbares Anregungslicht, sodass die beobachtete Fluoreszenz die inhärente Fluoreszenz des Farbstoffs zeigt und die spezifische Fluoreszenz der Probe leicht von der Eigenfluoreszenz des Hintergrundgewebes unterschieden werden kann.
2. BV-Anregungsmethode: Die Methode konzentriert sich auf 404 nm, 434 nm von ultraviolettem bis blauem Licht zur Anregung. Bei dieser Methode wird blaues Licht zur Bestrahlung der Probe verwendet, daher muss der Sperrfilter des Fluoreszenzbeobachtungssystems ein Filter sein, der das blaue Licht vollständig blockieren und die gewünschte grüne und gelbe Fluoreszenz vollständig durchlassen kann. Fluoreszierende Pigmente für die Fluoreszenzantikörpermethode. Da die Wellenlänge der maximalen Absorption des Anregungslichts und die Wellenlänge der maximalen Emission der Fluoreszenz nahe beieinander liegen, müssen die bei der BV-Anregungsmethode verwendeten Filter scharfe Sperrfilter sein. Bei dieser Methode wird blaues Licht als Anregungslicht verwendet, daher ist die Absorptionseffizienz des Fluorochroms höher und es kann ein helleres Bild erhalten werden. Der Nachteil besteht darin, dass Fluoreszenz unter 500 nm nicht sichtbar ist und über 500 nm das gesamte Bild gelb erscheint. Bei der Methode der fluoreszierenden Antikörper wird die Spezifität größtenteils anhand der dem Fluorochrom eigenen Farbe beurteilt. Die oben beschriebenen Nachteile der BV-Anregungsmethode wirken sich daher bei der Diskussion subtiler Spezifität tendenziell stark aus.
