Bestimmung der mikrobiellen Population – direkte mikroskopische Zählmethode!
I. Zweck Anforderungen
1. Das Prinzip der Hämatokritplattenzählung erläutern.
2. Beherrschen Sie die Methode der mikrobiellen Zählung mithilfe einer Hämatokritplatte.
II. Grundprinzipien
Bei der direkten Zählmethode unter dem Mikroskop wird eine kleine Menge der zu testenden Probe auf einen speziellen Objektträger mit definierter Fläche und Volumen (auch als bakteriologischer Zähler bekannt) suspendiert. Die direkte Zählung unter dem Mikroskop ist eine einfache, schnelle und intuitive Methode. Derzeit werden im In- und Ausland häufig folgende bakteriologische Zähler verwendet: Blutzellzählplatte, bakteriologische Zähler von Peteroff-Hauser und bakteriologische Zähler von Hawksley usw., die zum Zählen von Hefe, Bakterien, Schimmelsporen und anderen Suspensionen verwendet werden können. Das Grundprinzip ist dasselbe. Die beiden letztgenannten Zählertypen haben nach Auflegen des Deckglases ein Gesamtvolumen von 0,02 mm3 und der Abstand zwischen dem Deckglas und der Trägerscheibe beträgt nur 0,02 mm, sodass kleinere Zellen wie Bakterien mit einem Ölimmersionsobjektiv beobachtet und gezählt werden können. Neben der Verwendung dieser Zähler gibt es auch eine Schätzmethode für das Verhältnis von Abstrichfläche zu Sichtfeldfläche, die direkt unter dem Mikroskop beobachtet wird und im Allgemeinen für die bakteriologische Untersuchung von Kuhmilch verwendet wird. Die Vorteile der direkten Mikroskopzählmethode sind intuitiv, schnell und einfach zu bedienen. Der Nachteil dieser Methode besteht jedoch darin, dass das Ergebnis normalerweise die Summe der toten und lebenden Organismen ist. Es gibt einige Methoden, um diesen Nachteil zu überwinden, wie z. B. die Kombination einer mit lebenden Bakterien gefärbten Mikrokammerkultur (kurze Zeit) und die Zugabe von Zytokinese-Inhibitoren, um das Ziel zu erreichen, nur lebende Organismen zu zählen.
Bedienungsschritte
1, Zubereitung einer Bakteriensuspension
Verwenden Sie sterile Kochsalzlösung, um eine Bakteriensuspension aus Bierhefe mit der entsprechenden Konzentration herzustellen.
2, Spiegelzählkammer
Vor dem Hinzufügen von Proben sollte zunächst die Zählkammer der Zählplatte überprüft werden. Wenn sich dort Schmutz befindet, muss er vor dem Zählen gereinigt und trockengeblasen werden.
3.Beispiele hinzufügen
Reinigen und trocknen Sie die mit einem Deckglas abgedeckte Blutzellenzählplatte und schütteln Sie dann mit einer sterilen Kapillarbürette die Bierhefesuspension vom Rand des Deckglases, sodass ein kleiner Tropfen davon abfällt, sodass die Bakterienflüssigkeit durch Kapillarpenetration automatisch entlang des Spalts in die Zählkammer gelangt. Im Allgemeinen kann sich die Zählkammer mit Bakterienflüssigkeit füllen. Bei der Probenentnahme sollte die Bakterienlösung zunächst gut geschüttelt werden. Beim Hinzufügen von Proben sollten sich in der Zählkammer keine Luftblasen befinden.
4, Mikroskopzählung
Lassen Sie die Probe nach dem Hinzufügen 5 Minuten ruhen und legen Sie dann die Blutzellenzählplatte auf den Mikroskopträgertisch. Suchen Sie zuerst mit geringer Vergrößerung die Position der Zählkammer und ändern Sie dann zum Zählen die Vergrößerung auf hohe Vergrößerung. Passen Sie die Lichtintensität des Mikroskops entsprechend an. Bei Mikroskopen mit Reflektorlicht müssen Sie außerdem darauf achten, dass das Licht nicht zu einer Seite hin abgestrahlt wird, da sonst die Gitterlinien der Zählkammer im Sichtfeld nicht gut zu erkennen sind oder nur die vertikalen oder horizontalen Linien zu sehen sind. Wenn sich vor dem Zählen herausstellt, dass die Bakterienflüssigkeit zu dick oder zu dünn ist, muss die Verdünnung vor dem Zählen angepasst werden. Im Allgemeinen ist eine Probenverdünnung von etwa 5 bis 10 Bakterien pro Zelle angemessen. Für jede Zählkammer werden die Organismen in den 5 mittleren Kammern (4 Ecken und eine mittlere Kammer in der Mitte) zum Zählen ausgewählt. Die Organismen auf den Gitterlinien werden normalerweise nur auf den oberen und rechten Linien gezählt. Bei der Hefeknospenbildung zählt man als zwei Organismen, wenn der Knospenkörper die halbe Größe der Mutterzelle erreicht. Durch Zählen einer Probe aus den beiden Zählkammern wird der Durchschnittswert ermittelt, um den Bakteriengehalt der Probe zu berechnen.
5. Reinigung der Hämatokritplatte
Spülen Sie die Blutzellenzählplatte nach dem Gebrauch unter fließendem Wasser ab. Verwenden Sie zum Waschen und Bürsten keine harten Gegenstände. Trocknen Sie sie selbst oder verwenden Sie nach dem Waschen einen Föhn zum Trocknen. Untersuchen Sie die Platte mikroskopisch, um festzustellen, ob sich in jedem Fach noch Organismenrückstände oder andere Niederschläge befinden. Wenn sie nicht sauber ist, muss das Waschen wiederholt werden, bis sie sauber ist.
