Anpassung des abbildenden optischen Pfadsystems eines Lichtmikroskops und Übersicht über die mikroskopische Untersuchung
Anpassung des optischen Abbildungssystems und des mikroskopischen Untersuchungsschemas
Die Anpassung des optischen Abbildungssystems eines Mikroskops erfolgt entsprechend den Anforderungen verschiedener Mikroskopietechniken. Die sogenannte Mikroskopie ist kurz gesagt die Beleuchtungsmethode, die beim Betrachten einer Probe durch ein Mikroskop verwendet wird, sowie die Technik und Methode, um einen besseren Kontrast im von der Probe erzeugten Bild zu erzielen. Im Folgenden werden kurz die verschiedenen Methoden der Mikroskopie und die entsprechenden Anpassungsmethoden für das optische Abbildungssystem des Mikroskops beschrieben.
1. Transmissions-Hellfeld:
Dies ist die traditionellste und gebräuchlichste Anwendungsmethode seit Erfindung des Mikroskops. Grundkomponenten: a. Objektivlinse: Für die Hellfeldbeobachtung kann jede Objektivlinse verwendet werden. b. Spektiv: Es können alle Arten von Spektiven verwendet werden, vorzugsweise mit einer Aperturblende. Anpassungsmethode: Nachdem das Kuhler-Beleuchtungssystem des obigen Mikroskops angepasst wurde, kann die Hellfeldmethode angewendet werden. Anwendungsbereich: Alle gefärbten Gewebeschnitte, Blutausstriche usw. Vorsichtsmaßnahmen: a. Bei Verwendung der Hellfeldbeobachtungsmethode muss das Kuhler-Beleuchtungssystem angepasst werden. b. Die Blende des Sichtfelds darf nicht willkürlich geöffnet werden, und die Frontlinse des Kondensorspiegels muss bei Verwendung von Objektiven mit 10×, weniger als 10× und mehr als 10× tatsächlich außerhalb bzw. in den Strahlengang hinein positioniert sein. c. Die Aperturblende des Kondensorspiegels sollte nicht zum Einstellen der Helligkeit des Sichtfelds verwendet werden und die Höhe des Kondensorspiegels sollte nicht wahllos eingestellt werden, da sonst die Auflösung des Mikroskops verringert und die Auflösung des gefärbten Gewebes beschädigt wird. Die Auflösung des Mikroskops muss an das Kuhler-Beleuchtungssystem angepasst werden; d. Bei mikroskopischen Aufnahmen muss bei jeder Änderung der verwendeten Vergrößerung der Objektivlinse die Aperturblende der Kondensorlinse so angepasst werden, dass ihre Größe genau der im Objektiv verwendeten numerischen Apertur von 2/3 entspricht.
2. Durchlicht-Phasenkontrastverfahren:
Dies ist eine moderne Mikroskopuntersuchung einer Kontrastverstärkungsmethode. Grundkomponenten: Phasenkontrastobjektiv, helles Sichtfeld und Phasenkontrast-Mehrzweck-Spektiv, Fokussierfernrohr, Grünfilter.
Anpassungsmethoden:
a. Basierend auf der Einstellung des Kuhler-Beleuchtungssystems, fokussieren Sie die Probe klar mit der Hellfeldmethode
b. Drehen Sie das Spektiv auf Ph1, um die Skalenposition auszurichten, wählen Sie ein 10-fach Phasenkontrastobjektiv und ersetzen Sie die zu beobachtende transparente Probe.
c. Entfernen Sie eines der Okulare, ersetzen Sie es durch ein zentriertes Teleskop und fokussieren Sie auf die beiden Phasenkontrastringe im Sichtfeld (den schwarzen Phasenkontrastring der Objektivlinse und den Lichtdurchlässigkeits-Phasenkontrastring der Kondensorlinse).
d. Die beiden Phasenkontrastringe im Sichtfeld müssen nicht unbedingt übereinstimmen. Passen Sie die beiden Einstellvorrichtungen am Spektiv an (Einstellen der linken und rechten Position des Einstellhebels für den Phasenkontrastring und Einstellen der vorderen und hinteren Position des Reibungsknopfs), sodass der Lichtdurchlässigkeitsring für die Vorder- und Rückseite rechts und links mit dem schwarzen Ring übereinstimmt.
e. Wechseln Sie nach der Einstellung wieder zum Beobachtungsokular und drücken Sie den grünen Filter in den optischen Pfad, um das Phasenkontrastbild der Probe zu beobachten.
f. Wenn zur Beobachtung 20×- und 40×-Objektive verwendet werden, sollte die Spotting-Linse auf die Position Ph2 eingestellt werden, und bei Verwendung von 100-Objektiven sollte die Spotting-Linse auf die Position Ph3 eingestellt werden.
Anwendungsbereich: Es eignet sich zur Beobachtung transparenter, ungefärbter oder nicht färbbarer Proben, wie etwa aller Arten von Zellen, lebendem Gewebe, ungefärbten oder nicht gefärbten Gewebeschnitten, Wasserorganismen und so weiter.
3. Methode des Phasenkontrasts durch differentielle Interferenz:
Um das Problem zu lösen, dass bei der Phasenkontrastmethode die Beobachtung von Probendetails um das Bild herum von einem Halo begleitet wird, der die Details maskiert, die sichtbar sein sollten, und dass die Proben oder Gewebeschnitte eine relativ geringe Dicke erfordern (im Prinzip sind Dicken über 10 µm möglich) und andere Einschränkungen auftreten, wird das Prinzip der Zweistrahlinterferenz verwendet, um eine subdifferenzielle Interferenz-Phasenkontrastmethode zu entwickeln.
Anpassungsmethoden:
a. Die DIC-Methode muss angepasst werden, da das Kulemin-System bereits angepasst wurde
b. Bestimmen Sie mithilfe eines 10×-Objektivs die Fokussierungsposition des Objektivs, bei der die Probe mit einem hellen Sichtfeld klar zu erkennen ist.
c. Platzieren Sie den Polarisator im Beleuchtungspfad. Beachten Sie dabei, dass er in Ost-West-Richtung ausgerichtet sein sollte.
d. Drehen Sie den Kondensatorwählknopf auf die Position, die der Verwendung der 10 × Objektivlinse entspricht, also DIC 0.3-0.4.
e. Setzen Sie den DIC-Schieber für das 10×-Objektiv an der Rückseite des Objektivs oder am Objektivkonverter ein.
f. Setzen Sie den Analysator in den optischen Abbildungspfad ein und beachten Sie, dass er in Süd-Nord-Richtung ausgerichtet sein muss.
g. Legen Sie die zu beobachtende transparente Probe wieder ein und schalten Sie die Lichtquelle ein, um die Probe klar zu fokussieren.
h. Passen Sie den DIC-Einsatz so an, dass das Differentialinterferenzkontrastbild den besten Effekt, d. h. den deutlichsten Reliefeffekt, erzielt.
i. Gleichzeitig die Aperturblende des Kondensorspiegels so einstellen, dass auch der Kontrasteffekt optimal ist.
j. Optimieren Sie dann die Details der Probe, um die Struktur der Probe auf verschiedenen Ebenen anzuzeigen.
k. Wenn die Komplementärfarbe (Rotverzögerungsplatte erster Ordnung) eingesetzt und gleichzeitig der DIC-Einsatz eingestellt wird, sind im Sichtfeld ständig wechselnde brillante Farben zu sehen, mit Rot, Orange, Gelb, Grün, Blau, Lila, Rosa, Rosaviolett und Goldgelb. Anwendungsbereich: transparente oder nicht färbbare Gewebeschnitte, Dicke bis zu etwa 100 µm, lebendes Gewebe und lebende Zellen in Kultur, kleine lebende Organismen usw.
