Mehrere Hinweise und Tipps zur Verwendung der Phasenkontrastmikroskopie
Einsatz der Phasenkontrastmikroskopie
1) Installieren Sie das Phasenkontrastgerät: Entfernen Sie die Kondensorlinse des gewöhnlichen Mikroskops und installieren Sie die Kondensorlinse mit einer ringförmigen Blende an einem passenden Mikroskop. Entfernen Sie die normale Objektivlinse des Mikroskops und ersetzen Sie sie durch eine Objektivlinse mit Phasenplatte. Ersetzen Sie das Okular durch Fokussokulare für Phasenkontrastmikroskope. Am Lichteingang der Lichtquelle werden spezielle Grünfilter (manchmal nicht notwendig) angebracht.
2) Lichtausrichtung und Fokus: Stellen Sie das Fokussokular und die Dickeneinstellschraube ein, bis ein weißer und ein schwarzer Kreis deutlich im Sichtfeld zu sehen sind. Der schwarze Kreis ist fixiert und der weiße Kreis kann durch Einstellen der Schraube am Kondensorgerät so verschoben werden, dass der schwarze Kreis und der weiße Kreis vollständig übereinstimmen. Nehmen Sie das Fokussokular ab und ersetzen Sie es zur Überprüfung durch das Originalokular des Mikroskops.
Analyse von Problemen beim Einsatz von Phasenkontrastmikroskopen
1. Der Einfluss der Probendicke Bei der Phasenkontrastbeobachtung sollte die Dicke der Probe 5 μm oder weniger betragen. Bei Verwendung einer dickeren Probe ist die obere Schicht der Probe sehr klar, die tiefere Schicht wird jedoch unscharf und verursacht Phasenverschiebungsstörungen. und Lichtstreuung.
2. Der Einfluss von Deckglas und Objektträgerglas Die Probe muss mit einem Deckglas abgedeckt werden, da sonst der helle Ring der Ringblende und der dunkle Ring der Phasenplatte nur schwer überlappen können. Auch an die Glasqualität von Objektträgerglas und Deckglas stellt die Phasenkontrastbeobachtung hohe Anforderungen. Bei Kratzern, ungleichmäßiger Dicke oder Unebenheiten kommt es zu hellen Ringverzerrungen und Phasenstörungen. Wenn der Schieber außerdem zu dick oder zu dünn ist, wird der helle Ring der ringförmigen Blende größer oder kleiner.
3. Halo- und Fading-Effekt Wenn beim Bildgebungsprozess des Phasenkontrastmikroskops eine bestimmte Struktur aufgrund der Phasenverzögerung dunkel wird, ist dies kein Lichtverlust, sondern das Ergebnis einer Umverteilung des Lichts auf der Bildebene. So erscheint Licht, das scheinbar in dunklen Bereichen verloren geht, als heller Lichthof um dunklere Objekte herum. Dies ist ein Nachteil der Phasenkontrastmikroskopie, da sie die Beobachtung feiner Strukturen erschwert und das Halo-Phänomen bei sehr schmaler Ringblende schwerwiegender ist. Ein weiteres Phänomen in der Phasenkontrastmikroskopie ist der Schattierungseffekt, der sich auf den Kontrastverlust an den Rändern eines größeren Bereichs mit gleicher Phasenverzögerung bei Betrachtung mit Phasenkontrast bezieht.
4. Phasenumkehr Bei n'n ist der Hell-Dunkel-Kontrast des Bildes genau umgekehrt, was als Phasenumkehr bezeichnet wird. Es ist nicht erkennbar, wenn die Phasendifferenz δ=0 beträgt und der Kontrast mit zunehmendem δ größer wird. Die Phasenumkehr tritt auf, wenn δ weiter auf einen bestimmten Wert ansteigt. Bei Verwendung einer Objektivlinse mit 90 Prozent hohem Absorptionswert (hohem Kontrast) beträgt dieser Transformationswert etwa 0,55λ, und bei Verwendung einer Objektivlinse mit 70 Prozent Standardabsorptionswert beträgt er etwa 0,33λ . Um kleinere optische Wegunterschiede aufzulösen, sollten Objektive mit höheren Absorptionswerten verwendet werden.
