Welche Art von Mikroskop wird verwendet, um die Form mikrobieller Zellen zu erkennen?
Ein Sammelbegriff für alle winzigen Organismen, die für den Einzelnen mit bloßem Auge nur schwer zu beobachten sind. Zu den Mikroorganismen zählen Bakterien, Viren, Pilze und einige Algen. (Einige Mikroorganismen sind jedoch mit bloßem Auge sichtbar, z. B. Pilze, die zu Pilzen gehören, Ganoderma lucidum usw.) Viren sind eine Art „nichtzellulärer Organismen“, die aus wenigen Komponenten wie Nukleinsäuren und Proteinen bestehen, aber ihre Das Überleben muss von lebenden Zellen abhängen. Je nach den verschiedenen vorhandenen Umgebungen können sie in prokaryotische Mikroorganismen, Weltraum-Mikroorganismen, Pilz-Mikroorganismen, Hefe-Mikroorganismen, Meeres-Mikroorganismen usw. unterteilt werden.
Die Rolle und der Schaden von Mikroorganismen:
Eine der wichtigsten Auswirkungen von Mikroorganismen auf den Menschen ist die Verbreitung von Infektionskrankheiten. 50 Prozent der menschlichen Krankheiten werden durch Viren verursacht. Die Geschichte der Mikroben, die beim Menschen Krankheiten verursachen, ist die Geschichte des ständigen Kampfes des Menschen mit ihnen. Der Mensch hat bei der Vorbeugung und Behandlung von Krankheiten große Fortschritte gemacht, doch es kommt weiterhin zu neuen und wiederkehrenden mikrobiellen Infektionen, wie zum Beispiel einer großen Zahl von Viruserkrankungen, für die es an wirksamen therapeutischen Medikamenten mangelt. Der pathogene Mechanismus einiger Krankheiten ist nicht klar. Der Missbrauch einer großen Anzahl von Breitbandantibiotika hat zu einem starken Selektionsdruck geführt, der zur Mutation vieler Stämme und damit zur Entstehung von Arzneimittelresistenzen geführt hat, und die menschliche Gesundheit wird durch neue Bedrohungen gefährdet. Einige segmentierte Viren können durch Rekombination oder Neusortierung mutieren. Das typischste Beispiel ist das Grippevirus.
Welche Art von Mikroskop sollte der Experimentator verwenden, wenn er Mikroorganismen untersucht, um sie zu sehen, nachdem er die spezifische Definition von Mikroorganismen kennengelernt hat, und welches Mikroskop kann verwendet werden, um besser zu sehen und häufig vorkommende mikrobielle Formen zu beobachten und zu analysieren?
Die Erfindung des Mikroskops besteht darin, lächelnde Objekte sehen zu können, die mit bloßem Auge nicht sichtbar sind. Da Mikroorganismen sehr klein sind, müssen sie vergrößert und mit Hilfe eines Mikroskops beobachtet werden. Darüber hinaus gibt es viele Arten von Mikroorganismen, sodass grundsätzlich die meisten optischen Mikroskope geeignet sind. Um Mikroorganismen zu beobachten, stellt sich als nächstes die Frage, welcher Mikroskoptyp für die Beobachtung und Analyse von Mikroorganismen verwendet werden sollte. Zu den gängigen Mikroskopen zur Beobachtung der mikrobiellen Morphologie gehören biologische Mikroskope, Phasenkontrastmikroskope, inverse Mikroskope, Fluoreszenzmikroskope und konfokale Mikroskope. Mikroskop und so weiter.
Im Folgenden werden die verschiedenen Mikroskope beschrieben, die zur Beobachtung von Mikroorganismen verwendet werden:
1. Gewöhnliches Lichtmikroskop
Als Lichtquelle wird natürliches Licht bzw. Licht verwendet, dessen Wellenlänge etwa {{0}},4 μm beträgt. Die Auflösung des Mikroskops beträgt die Hälfte der Wellenlänge, also 0,2 μm, und das kleinste mit bloßem Auge sichtbare Bild beträgt 0,2 mm. Daher kann die Verwendung eines Ölspiegels (Immersionsspiegels) zur 1000-fachen Vergrößerung die 0,2 μm großen Partikel auf 0,2 mm vergrößern, die mit bloßem Auge sichtbar sind. Für die Beobachtung von Bakterien, Actinomyceten und Pilzen können gewöhnliche optische Mikroskope verwendet werden.
2. Die Dunkelfeldmikroskopie wird üblicherweise zur Beobachtung der ungefärbten mikrobiellen Morphologie und Bewegung eingesetzt. Nachdem der Dunkelfeldkondensor in ein normales Mikroskop eingebaut wurde, kann das Licht nicht direkt aus der Mitte eindringen und das Sichtfeld ist dunkel. Wenn die Probe schräges Licht vom Rand des Kondensors empfängt, kann es gestreut werden, sodass helle Mikroorganismen wie Bakterien oder Spirochäten im dunklen Feldhintergrund beobachtet werden können.
3. Phasenkontrastmikroskop Das Phasenkontrastmikroskop nutzt den Lichteffekt der Phasendifferenzplatte, um die Lichtphase und -amplitude des direkten Lichts zu ändern und die Differenz der Lichtphase in eine Lichtintensitätsdifferenz umzuwandeln. Wenn unter einem Phasenkontrastmikroskop Licht durch eine ungefärbte Probe fällt, wird der Unterschied in der Lichtphase durch die Inkonsistenz der Dichte verschiedener Teile der Probe verursacht, und es können die Morphologie, die innere Struktur und die Bewegungsart von Mikroorganismen beobachtet werden.
4. Fluoreszenzmikroskop Das Fluoreszenzmikroskop ist im Grunde dasselbe wie ein gewöhnliches optisches Mikroskop. Der Hauptunterschied besteht in der Lichtquelle, dem Filter und dem Kondensor. Derzeit verwenden die meisten von ihnen Epi-Light-Geräte, und als Lichtquellen werden üblicherweise Quecksilberhochdrucklampen verwendet, die ultraviolettes oder blauviolettes Licht emittieren können. Es gibt zwei Arten von Filtern: Anregungsfilter und Absorptionsfilter. Neben allgemeinen Hellfeldkondensoren können in Fluoreszenzmikroskopen auch Dunkelfeldkondensoren eingesetzt werden, die blaues Licht nutzen, um den Kontrast zwischen Fluoreszenz und Hintergrund zu verstärken. Diese Methode eignet sich zum Nachweis oder zur Identifizierung von Bakterien, die mit fluoreszierenden Pigmenten gefärbt oder mit fluoreszierenden Antikörpern kombiniert sind.
5. Elektronenmikroskope nutzen den Elektronenfluss als Lichtquelle. Im Vergleich zum sichtbaren Licht unterscheidet sich die Wellenlänge um ein Zehntausendfaches, was die Auflösung deutlich verbessert. Die Magnetspule wird als optisches Verstärkungssystem verwendet und die Vergrößerung kann das Zehntausende oder Hunderttausendfache erreichen. Es wird häufig in Viruspartikeln verwendet. und die Beobachtung der bakteriellen Ultrastruktur.
Beobachtung ungefärbter mikrobieller Proben:
Ungefärbte Proben können im Allgemeinen zur Beobachtung der Morphologie, Kraft und Bewegung von Bakterien verwendet werden. Bakterien sind im ungefärbten Zustand farblos und transparent und werden unter dem Mikroskop hauptsächlich anhand des Unterschieds zwischen dem Brechungsindex der Bakterien und der Umgebung beobachtet. Bakterien mit Flagellen bewegen sich kräftig, während Bakterien ohne Flagellen eine unregelmäßige Brownsche Bewegung zeigen. Lebensfähige Bakterien wie Treponema pallidum, Leptospira und Campylobacter weisen charakteristische Formen und Bewegungsmuster auf, die von diagnostischer Bedeutung sind. Häufig verwendete Methoden sind die Druckabfallmethode, die Pendant-Drop-Methode und die Kapillarmethode.
1. Methode mit hängendem Tropfen Tragen Sie Vaseline um das konkave Loch des sauberen konkaven Glasobjektträgers auf, nehmen Sie einen Ring aus Bakteriensuspension mit einer Impföse und legen Sie ihn in die Mitte des Deckglases. Richten Sie dann das konkave Loch des konkaven Glasobjektträgers aus Setzen Sie den Tropfen in die Mitte des Deckglases und setzen Sie die Abdeckung auf, drehen Sie sie dann schnell um, drücken Sie leicht auf das Deckglas, damit es fest an der Vaseline am Rand des konkaven Lochs haftet, und beobachten Sie es dann unter hoher Leistung Mikroskop (oder Dunkelfeld).
2. Nehmen Sie einen Ring aus Bakteriensuspension mit einer Impföse und platzieren Sie ihn mithilfe der Druckabfallmethode in der Mitte eines sauberen Glasobjektträgers. Decken Sie die Bakteriensuspension vorsichtig mit einem Deckglas ab und achten Sie darauf, dass keine Luftblasen entstehen dass die Bakteriensuspension nicht überläuft. Hellfeld- (oder Dunkelfeld-)Beobachtung unter einem Hochleistungsobjektiv.
3. Die Kapillarmethode wird hauptsächlich zur Untersuchung der Kinetik anaerober Bakterien eingesetzt. Wählen Sie normalerweise eine Länge von 60~70mm. Nachdem Sie die anaerobe Bakteriensuspension durch eine Kapillare mit einer Öffnung von 0,5-1,0 mm gesaugt haben, verschließen Sie die beiden Enden der Kapillare mit einer Flamme. Die Kapillare wurde mit Plastikpapier auf dem Objektträger fixiert und unter einer Hochleistungslinse im Dunkelfeld beobachtet.
Beobachtung gefärbter mikrobieller Proben mit einem Mikroskop:
Nachdem die Bakterienprobe gefärbt wurde, können aufgrund des starken Farbkontrasts zwischen den Bakterien und der Umgebung die morphologischen Eigenschaften der Bakterien (wie Größe, Form, Anordnung usw.) und einige spezielle Strukturen verändert werden Unter einem gewöhnlichen optischen Mikroskop sind sie deutlich sichtbar (z. B. Kapseln, Flagellen, Sporen usw.), und die Bakterien können anhand der Färbereaktivität klassifiziert und identifiziert werden.
(1) Allgemeine Vorgehensweise bei der Bakterienfärbung Die allgemeine Vorgehensweise bei der Bakterienfärbung ist: Abstrich (Trocknung) – Fixierung – Färbung.
1. Abstrichvorbereitung von Blut, Sekreten, Ausscheidungen, Punktionsflüssigkeit und Flüssigkultur sowie direkte Dünnschichtausstriche auf Glasobjektträgern; Bei einer Autopsie oder bei infiziertem Tiergewebe wischen Sie die Läsion zur Probenahme mit einem Wattestäbchen ab. Zur Vorbereitung von Bakterienkolonien oder Rasenflächen auf festem Medium verwenden Sie zunächst eine Impföse, um einen Ring normaler Kochsalzlösung zu entnehmen und in die Mitte des Objektträgers zu legen. Anschließend nehmen Sie mit einer sterilen Impföse eine kleine Menge Kultur und zermahlen diese Verteilen Sie es gleichmäßig in normaler Kochsalzlösung und verteilen Sie es auf 1 cm2. Große oder kleine lackierte Flächen, lassen Sie es auf natürliche Weise bei Raumtemperatur trocknen oder trocknen Sie es langsam aus der Ferne.
2. Der Zweck der Fixierung besteht darin, Bakterien abzutöten, Bakterienprotein und -struktur zu koagulieren und die Färbung zu erleichtern. Fördern Sie die Anhaftung von Bakterien am Objektträger, um zu verhindern, dass sie beim Waschen durch Wasser weggespült werden. Ändern Sie die Permeabilität von Bakterien für Farbstoffe, was sich positiv auf die Struktur der Bakterienzellen beim Färben auswirkt. Die Fixierung erfolgt üblicherweise durch Erhitzen mit einer Flamme und der getrocknete Ausstrich wird dreimal schnell durch die Flamme geführt. Es ist besser, die Haut am Handrücken nicht zu verbrennen, wenn er den Schlitten berührt.
3. Färben Wählen Sie je nach Inspektionszweck unterschiedliche Färbemethoden zum Färben. Geben Sie beim Färben die Farbstofflösung tropfenweise hinzu, um die Deckkraft zu erhöhen.
4. Beizmittel Jede Substanz, die die Affinität zwischen dem Farbstoff und dem gefärbten Objekt verstärken, den Farbstoff auf dem gefärbten Objekt fixieren und eine Änderung der Durchlässigkeit der Zellmembran bewirken kann, wird Beizmittel genannt. Üblicherweise werden Alaun, Gerbsäure, Metallsalze und Jod usw. verwendet, und auch Erhitzen wird zur Förderung der Färbung eingesetzt. Beizmittel können zwischen Primärfärbung und Gegenfärbung verwendet werden, können aber auch nach der Fixierung verwendet werden oder in Fixiermittel und Färbung enthalten sein.
5. Entfärbung Jedes chemische Mittel, das die Farbe des gefärbten Objekts entfernen kann, wird als Entfärbungsmittel bezeichnet. Als Entfärber werden üblicherweise Ethanol, Aceton usw. verwendet. Das Entfärbungsmittel kann den Grad der Stabilität der Kombination aus Bakterien und Farbstoffen erkennen, die für die Differenzfärbung verwendet werden kann.
6. Gegenfärben Entfärbte Bakterien oder deren Strukturen werden häufig zur leichteren Beobachtung mit einer Gegenfärbelösung gegengefärbt. Die Farbe der Gegenfärbelösung unterscheidet sich von der der Primärfärbelösung, um einen scharfen Kontrast zu erzeugen. Die Gegenfärbung sollte nicht zu stark sein, um die Farbe der ursprünglichen Färbung nicht zu verdecken.
