Hinsichtlich ihres optischen Pfades gibt es zwei Typen von Fluoreszenzmikroskopen:
1. Durchstrahlungs-Fluoreszenzmikroskop: Die Anregungslichtquelle wird durch den Kondensorspiegel durch das Probenmaterial geleitet, um die Fluoreszenz anzuregen. Normalerweise wird ein Dunkelfeldkollektor verwendet, aber auch ein gewöhnlicher Kollektor kann verwendet werden. Der Reflektor wird so eingestellt, dass das Anregungslicht durchgelassen und zur Probe geleitet wird. Dies ist der ältere Typ eines Fluoreszenzmikroskops. Der Vorteil ist, dass die Fluoreszenz bei geringer Vergrößerung stark ist, und der Nachteil ist, dass die Fluoreszenz mit zunehmender Vergrößerung schwächer wird. Daher ist es besser, größere Probenmaterialien zu beobachten.
2. Fluoreszenzmikroskop vom Falltyp Dies ist ein neuer Typ von Fluoreszenzmikroskop, der vor kurzem entwickelt wurde. Der Unterschied besteht darin, dass das Anregungslicht von der Objektivlinse zur Oberfläche der Probe geleitet wird, d. h., die Beleuchtung erfolgt über dieselbe Objektivlinse wie der Konzentrator und die Fluoreszenzsammellinse. Der optische Pfad muss um einen Zweifarbenstrahlseparator erweitert werden, der in einem Winkel von 45° zum Licht steht. Das Anregungslicht wird in die Objektivlinse reflektiert und in der Probe gesammelt. Die von der Probe und der Objektivlinse erzeugte Fluoreszenz wird von der Oberfläche des Deckglases reflektiert und gleichzeitig in die Objektivlinse und zurück zum Zweifarbenstrahlseparator geleitet, sodass das Anregungslicht und die Fluoreszenz vom restlichen Anregungslicht getrennt und dann von den Sperrfiltern absorbiert werden. Durch Verwendung verschiedener Anregungsfilter/Zweifarbenstrahlseparatoren/Sperrfilter können die Anforderungen verschiedener Fluoreszenzreaktionsprodukte erfüllt werden. Die Vorteile dieses Fluoreszenzmikroskops liegen in der gleichmäßigen Ausleuchtung des Sichtfelds und der klaren Abbildung. Je stärker die Vergrößerung, desto stärker die Fluoreszenz.
(B) Fluoreszenzmikroskop-Methode.
1. Öffnen Sie die Lichtquelle und heizen Sie die Ultrahochdruck-Quecksilberlampe einige Minuten lang vor, um den hellsten Punkt zu erreichen.
2. Das Transmissionsfluoreszenzmikroskop muss zwischen der Lichtquelle und dem zur Anregung des Filters erforderlichen Konzentrator auf der Rückseite der Objektivlinse mit dem entsprechenden Sperrfilter installiert werden. Das fallende Fluoreszenzmikroskop muss in den Schlitz des optischen Pfads des erforderlichen Anregungsfilters / Zweifarbstrahlteilers / Sperrfiltereinsatzes eingesetzt werden.
3. Beobachten Sie mit einer Linse mit geringer Vergrößerung und stellen Sie den Mittelpunkt der Lichtquelle so ein, dass er sich gemäß der Einstellvorrichtung verschiedener Modelle von Fluoreszenzmikroskopen in der Mitte des gesamten Beleuchtungsflecks befindet.
4. Legen Sie die Probenscheibe ein, und beobachten Sie die Fokussierung. Bei der Verwendung sollten Sie Folgendes beachten: Beobachten Sie die Probe nicht direkt am Ende der Filterinstallation, um Augenschäden zu vermeiden. Wenn Sie die Probe mit einem Ölspiegel beobachten, müssen Sie einen speziellen, nicht fluoreszierenden Ölspiegel verwenden. Die Hochdruck-Quecksilberlampe kann nicht sofort nach dem Ausschalten wieder eingeschaltet werden. Sie müssen 5 Minuten warten, bevor Sie sie erneut starten können. Andernfalls wird sie instabil und die Lebensdauer der Quecksilberlampe wird beeinträchtigt.
(C) Beobachtung Unter dem Fluoreszenzmikroskop auf der Lehrbühne mit einem blau-violetten Lichtfilter sind mit 0,01 % Amidin-Orange-Fluoreszenzfarbstoff gefärbte Zellen zu sehen, und der Zellkern und das Zytoplasma der Zellen werden zur Erzeugung von zwei verschiedenen Fluoreszenzfarben (dunkelgrün und orangerot) angeregt.
