Der Unterschied zwischen einem konfokalen Lasermikroskop und einem herkömmlichen optischen Mikroskop
Die konfokale Laser-Scanning-Fluoreszenzmikroskopie ist ein relativ fortschrittliches molekular- und zellbiologisches Analyseinstrument, das Computer-, Laser- und Bildverarbeitungstechnologie nutzt, um dreidimensionale Daten biologischer Proben zu erhalten. Es wird hauptsächlich zur Beobachtung der Struktur lebender Zellen und der biologischen Veränderungen bestimmter Moleküle und Ionen, zur quantitativen Analyse und zur quantitativen Bestimmung in Echtzeit verwendet.
Das Prinzip der konfokalen Lasermikroskopie: Verwenden Sie die Beleuchtungslochblende hinter der Lichtquelle und die Detektionslochblende vor dem Detektor, um Punktbeleuchtung und Punktdetektion zu realisieren. Das von der Lichtquelle durch die Beleuchtungslochblende emittierte Licht wird auf einen Punkt in der Brennebene der Probe fokussiert, und die von diesem Punkt emittierte Fluoreszenz wird auf der Detektionslochblende abgebildet, und jegliches emittierte Licht außerhalb dieses Punktes wird durch die Detektion blockiert Lochblende. Die Beleuchtungslochblende und die Detektionslochblende sind mit dem bestrahlten bzw. erfassten Punkt konjugiert, sodass der erfasste Punkt der konfokale Punkt und die Ebene, in der sich der erfasste Punkt befindet, die konfokale Ebene ist.
Der Computer zeigt die erkannten Punkte in Form von Bildpunkten auf dem Computerbildschirm an. Um ein vollständiges Bild zu erzeugen, scannt das Scansystem im Strahlengang die Brennebene der Probe, um ein vollständiges konfokales Bild zu erzeugen. Solange sich der Tisch entlang der Z-Achse auf und ab bewegt, wird eine neue Schicht der Probe in die konfokale Ebene bewegt und die neue Schicht der Probe auf dem Monitor abgebildet. Durch die kontinuierliche Bewegung der Z-Achse können kontinuierlich Bilder verschiedener Schichten der Probe gewonnen werden. Lichtgeschnittenes Bild.
Der Unterschied zwischen herkömmlichen Lichtmikroskopen
Herkömmliche Fluoreszenzmikroskope haben einen unüberwindbaren Mangel: Die fluoreszierenden Strukturen außerhalb der Fokusebene sind unscharf und unscharf. Der Grund dafür ist, dass die meisten biologischen Proben überlappende Strukturen aufweisen. Wenn die fluoreszenzmarkierten Strukturen auf verschiedenen Ebenen verteilt sind und sich überlappen, wird die gestreute Fluoreszenz von oberhalb oder unterhalb der Fokusebene auch von der Objektivlinse erfasst und die Auflösung des Fluoreszenzmikroskops wird erheblich verbessert. reduzieren.
Auf der Grundlage herkömmlicher optischer Mikroskope verwenden konfokale Laser-Scanning-Mikroskope Laserlicht als Lichtquelle, übernehmen das Prinzip und die Vorrichtung der konjugierten Fokussierung und verwenden Computer zur digitalen Bildverarbeitung, Beobachtung, Analyse und Ausgabe der beobachteten Objekte. Die Probe kann tomographisch gescannt und abgebildet werden, um die dreidimensionale räumliche Struktur von Zellen zerstörungsfrei zu beobachten und zu analysieren. Gleichzeitig kann diese Technologie mithilfe von Immunfluoreszenzmarkierungs- und Ionenfluoreszenzmarkierungssonden nicht nur fixierte Zellen und Gewebeabschnitte beobachten, sondern auch eine dynamische Echtzeitbeobachtung und -erkennung der Struktur, Moleküle, Ionen und Lebensaktivitäten lebender Zellen durchführen. auf subzellulärer Ebene Die Beobachtung physiologischer Signale wie Ca2+, pH-Wert, Membranpotential und Veränderungen der Zellmorphologie ist zu einer neuen Generation leistungsstarker Forschungsinstrumente in den Bereichen Morphologie, molekulare Zellbiologie, Neurowissenschaften, Pharmakologie und Genetik geworden.
