Prinzipien der konfokalen Mikroskopie und das Feld
1. Im konfokalen Mikroskop wird das reflektierte Licht auf dem optischen Pfad durch eine halbreflektierende Halblinse ergänzt. Das durch die Linse reflektierte Licht wird in die andere Richtung gefaltet. Im Brennpunkt befindet sich eine Blende mit einem kleinen Loch. Das Loch befindet sich im Brennpunkt, hinter der Blende befindet sich ein Photomultiplier. Man kann sich vorstellen, dass das reflektierte Licht vor und nach dem Brennpunkt des Detektorlichts durch dieses konfokale System nicht auf das kleine Loch fokussiert werden kann und durch die Blende blockiert wird. Daher misst das Photometer die Intensität des reflektierten Lichts im Brennpunkt.
2. Prinzip: Ein herkömmliches optisches Mikroskop verwendet eine Feldlichtquelle. Das Bild jedes Punkts auf der Probe wird durch Beugung oder Streuung des Lichts von benachbarten Punkten gestört. Ein konfokales Laser-Scan-Mikroskop verwendet einen Laserstrahl, der durch eine beleuchtete Lochblende auf der Probe eine punktförmige Lichtquelle bildet. Durch Scannen jedes Punkts auf der Probe in der Brennebene wird die Probe bestrahlt. Bei der Bildgebung wird die Lochblende erkannt. Durch die Erkennung der Lochblende wird die Lichtintensität durch einen Photomultiplier (PMT) oder ein kaltes Elektrokopplungsgerät (cCCD) Punkt für Punkt oder Zeile für Zeile mit einem Photometer gemessen. Das cCCD empfängt Punkt für Punkt oder Zeile für Zeile ein fluoreszierendes Bild auf dem Bildschirm eines Computermonitors. Die Beleuchtungs- und Detektionslochblende sind in Bezug auf die Brennebene der Objektivlinse konjugiert, der Punkt auf der Brennebene wird gleichzeitig auf die Beleuchtungs- und die Emissionslochblende fokussiert und der Punkt außerhalb der Brennebene wird nicht auf die Detektionslochblende abgebildet, sodass das konfokale Bild ein optischer Querschnitt der Probe ist, wodurch die Nachteile des unscharfen Bilds eines gewöhnlichen Mikroskops überwunden werden.
3. Anwendungsgebiete: Medizin, Tier- und Pflanzenforschung, Biochemie, Bakteriologie, Zellbiologie, Embryogewebe, Lebensmittelwissenschaft, Genetik, Pharmakologie, Physiologie, Optik, Pathologie, Botanik, Neurowissenschaft, Meeresbiologie, Materialwissenschaft, Elektronik, Mechanik, Erdölgeologie, Mineralogie.
