Prinzip und strukturelle Eigenschaften des Fluoreszenzmikroskops
Das Fluoreszenzmikroskop verwendet einen Punkt mit hoher Lichtausbeute, um Licht mit einer bestimmten Wellenlänge (z. B. ultraviolettes Licht 3650 oder violett-blaues Licht 4200) als Anregungslicht durch das Farbfiltersystem zu emittieren und regt dann die fluoreszierenden Substanzen in der Probe zum Emittieren an Fluoreszenz mit verschiedenen Farben und beobachtet sie dann durch die Verstärkung der Objektivlinse und des Okulars. Auf diese Weise ist es vor dem stark kontrastreichen Hintergrund selbst bei sehr schwacher Fluoreszenz leicht zu identifizieren und weist eine hohe Empfindlichkeit auf. Es wird hauptsächlich zur Untersuchung der Zellstruktur und -funktion sowie der chemischen Zusammensetzung verwendet. Die Grundstruktur eines Fluoreszenzmikroskops besteht aus einem gewöhnlichen optischen Mikroskop und einigen Zubehörteilen (z. B. Fluoreszenzlichtquelle, Anregungsfilter, dichroitischer Strahlteiler und Sperrfilter usw.). Fluoreszenzlichtquelle – Im Allgemeinen wird eine Ultrahochdruck-Quecksilberlampe (50-200W) verwendet, die Licht mit verschiedenen Wellenlängen emittieren kann, aber jede fluoreszierende Substanz hat eine Anregungslichtwellenlänge, die die stärkste Fluoreszenz erzeugt Es ist notwendig, Anregungsfilter (im Allgemeinen ultraviolette, violette, blaue und grüne Anregungsfilter) hinzuzufügen, damit nur eine bestimmte Wellenlänge des Anregungslichts zur Probe übertragen wird und alles andere Licht absorbiert wird. Nachdem jede Substanz mit Anregungslicht bestrahlt wurde, emittiert sie in sehr kurzer Zeit sichtbare Fluoreszenz, die länger als die Bestrahlungswellenlänge ist. Fluoreszenz hat eine Spezifität, die im Allgemeinen schwächer ist als Anregungslicht. Um die spezifische Fluoreszenz zu beobachten, muss sie hinter der Objektivlinse blockiert (oder unterdrückt) werden und muss zusammen verwendet werden.
Unterschied zwischen Fluoreszenzmikroskop und gewöhnlichem Mikroskop
1. Der Beleuchtungsmodus ist normalerweise episodisch, das heißt, die Lichtquelle wird durch die Objektivlinse auf die Probe projiziert;
2. Die Lichtquelle ist ultraviolettes Licht mit kurzer Wellenlänge und höherer Auflösung als bei gewöhnlichen Mikroskopen;
3. Es gibt zwei spezielle Filter: Der vor der Lichtquelle dient zum Herausfiltern des sichtbaren Lichts und der zwischen dem Okular und der Objektivlinse dient zum Herausfiltern von ultraviolettem Licht, um die Augen der Menschen zu schützen.
Auch das Fluoreszenzmikroskop ist eine Art optisches Mikroskop, der Hauptunterschied besteht darin, dass ihre Anregungswellenlängen unterschiedlich sind. Dies bestimmt den Unterschied zwischen einem Fluoreszenzmikroskop und einem gewöhnlichen optischen Mikroskop in Struktur und Verwendung.
Das Fluoreszenzmikroskop ist das grundlegende Werkzeug der Immunfluoreszenzzytochemie. Es besteht aus Lichtquelle, Filterplattensystem und optischem System. Es verwendet Licht mit einer bestimmten Wellenlänge, um die Probe zur Emission von Fluoreszenz anzuregen, und vergrößert es durch das Objektiv- und Okularsystem, um das Fluoreszenzbild der Probe zu beobachten.
