Anforderungen an die Dicke optischer Mikroskope für Glasobjektträger
Mikroskopische Dehydrierung und Probenbefestigung: Durch wiederholte Zentrifugation gehen die Zellen verloren. Daher ist es am besten, die Zellen auf der Oberfläche eines Glasobjektträgers oder einer Plastikfolie für die optische Mikroskopie zu befestigen, damit die Zellen zusammen mit dem Glas dehydriert und getrocknet werden Rutsche oder Plastikfolie. Anforderungen an die Dicke von Glasobjektträgern in der optischen Mikroskopie Um die Anlagerung von Zellen an Glasobjektträger oder Kunststofffolien zu ermöglichen, ist es notwendig, zunächst eine Filmschicht auf Glasobjektträger oder Kunststofffolien aufzubringen. Die Verlegung der Folie erfolgt wie folgt:
(1) Die einfachste Methode für die optische Mikroskopie besteht darin, eine dünne Schicht einer Polyvinylformalfolie (Formvar) aufzutragen. Die gereinigten Objektträger in (0.5-1)-prozentiger Polyvinylformal-Chloroformlösung einweichen. Nachdem sich die Atmosphäre verflüchtigt hat, bildet sich auf den Objektträgern ein weißer Film. Schütteln Sie die Objektträger mehrmals im Chloroform, um den Film zu verändern. Dünn und gebrauchsfertig.
(2) Tropfen Sie 0.1 Breitengrad Poly-L-Lysin (lösen Sie 1 mg Poly-Lysin in 1 ml gefiltertem Wasser während der Vorbereitung auf) auf den gereinigten Glasobjektträger und legen Sie ihn nach der Entfaltung des Tropfens in eine 450 °C warme Vorratsbox . trocken. Diese Methode ist am besten geeignet, da Poly-L-Lysin positiv geladen ist und so die Anlagerung von mehr negativ geladenen Oberflächenzellen ermöglicht.
(3) Geben Sie Plasma und Glycerin zu destilliertem Wasser im Verhältnis von (30--40) Prozent und (3-5) Prozent entsprechend den Anforderungen des optischen Mikroskops für die Dicke des Objektträgers hinzu, um ein Glycerinprotein zu bilden Lösung. Die Flüssigkeit wird auf den gereinigten Objektträger getropft, entfaltet und unter dem Lichtmikroskop getrocknet. Der gelegte Proteinfilm wird zur Fixierung des Proteins in 2-prozentiges Glutaraldehyd getaucht, gewaschen und für die spätere Verwendung getrocknet. Vor der Verwendung wird das Plasma auf den Proteinfilm getropft, „aktiviert“, nach 30 Minuten mit Puffer abgespült und kann direkt aufgetragen werden.
Die fixierten und gereinigten Zellen werden mit gefiltertem Wasser unter einem Digitalmikroskop in eine Zellsuspension geeigneter Konzentration gebracht, und das optische Mikroskop wird auf einen Glasobjektträger oder eine Plastikfolie gelegt, die mit einer Membran bedeckt ist, und in einen feuchten, niedrigen Raum gestellt Temperatur (40C) Umgebung (30-120) Minuten, damit sich die Zellen an der Membran festsetzen können. Nehmen Sie den Glasobjektträger mit einer feinen Pinzette auf, schütteln Sie ihn in sauberem doppelt destilliertem Wasser und waschen Sie nicht anhaftende Zellen mit einem optischen Mikroskop ab. Anforderungen an die Dicke von Objektträgern in optischen Mikroskopen Polarisationsmikroskope werden dann schnell in ein mit 50 Prozent Aceton (oder Ethanol) gefülltes Gefäß gestellt. Der Dehydrierungsprozess besteht darin, die Objektträger alle 3 Minuten in Aceton oder Ethanol mit steigender Konzentration zu legen und die Konzentration des Dehydratisierungsmittels im Objektträgerbehälter aus Glas unter dem optischen Mikroskop oder kontinuierlich zu erhöhen. Nach den Laborerfahrungen des Autors ist letzterer Vorgang bequemer. Die spezielle Methode der optischen Mikroskopie kann alle 3 Minuten die Hälfte des Entwässerungsmittels im Behälter absaugen und dann die gleiche Menge Entwässerungsmittel mit einer Konzentration von 100 Prozent hinzufügen. Nach 5-6 Vorgängen erreicht die Konzentration des Dehydratisierungsmittels im Mikroskoppreisgefäß über 0,5 Prozent und die Zellen werden erfolgreich dehydriert. Nach dem Trocknen am kritischen Punkt wird der Glasobjektträger oder die Kunststofffolie zur Metallbeschichtung mit leitfähigem Klebstoff auf den Probensteg geklebt. Es gibt auch praktische Möglichkeiten, Zellen an Membranen zu befestigen, die mit der dritten Methode hergestellt wurden. Durch ein optisches Mikroskop können die durch niedrige Glutaraldehydkonzentration fixierten Zellen auf dem „aktivierten“ Proteinfilm fixiert werden. Das optische Mikroskop erfordert, dass die Dicke des Glasobjektträgers 10 Minuten lang platziert wird und der Glasobjektträger oder die Plastikfolie in 2 Prozent Glutaraldehyd getränkt wird. Nach 30 Minuten mit gefiltertem doppelt destilliertem Wasser abspülen und dann gemäß der oben beschriebenen Methode dehydrieren, trocknen und metallbeschichten.
