Methoden zur Probenvorbereitung für die optische und Elektronenmikroskopie von Filmen
Die Mikroverfilmungsmethode umfasst im Allgemeinen vier Kategorien: Schnittmethode, Gesamtversiegelungsmethode, Beschichtungsmethode und Pressmethode.
①Schnittmethode. Die Dicke der optischen Mikroskopschnitte liegt zwischen 2 und 25 Mikrometern. Bei Pflanzen- und Tiermaterialien ist eine Schnittdicke von etwa 10 Mikrometern angemessen. Die Schnittmethode variiert je nach Einbettungsmittel. Üblicherweise werden Paraffinschnittmethoden, Baumwollleimschnittmethoden, Gefrierschnittmethoden und die Glykolmethacrylatmethode (GMA-Methode) verwendet. Die Paraffinschnittmethode umfasst die Schritte Fixierung, Einbettung, Schnitt, Färbung, Dehydrierung und Versiegelung. Der Schlüssel besteht darin, das Biomaterial in Paraffinwachs einzubetten und Paraffinwachs als Unterlage zu verwenden, um das in den Wachsblock eingetauchte Biomaterial in ideal dünne Scheiben zu schneiden. Der Vorgang läuft wie folgt ab: Fixierung → Waschen mit Wasser → schrittweise Dehydratisierung von Alkohol mit niedriger zu hoher Konzentration → Xylol-Transparenz → Wachseintauchen → Einbetten → Schneiden → Flicken → Xylol-Entwachsen → schrittweise Behandlung von Alkohol mit hoher zu niedriger Konzentration und schließlich Übergang zu Wasser → Färben → schrittweise Dehydratisierung von Alkohol mit niedriger zu hoher Konzentration → Xylol-Transparenz → Versiegeln mit Harzkleber. Die grundlegenden Schritte sind bei allen Arten von Filmherstellungstechniken dieselben.
② Integrale Versiegelungsmethode. Wird für einzelne Zellen, winzige Organismen oder verstreute Organe der Ganzfilmmethode verwendet. Diese Methode erfordert auch verschiedene Schritte der Fixierung, Färbung, Dehydratisierung, Transparenz und Versiegelung. Diese Methode wird zur Präparation der Mundwerkzeuge von Florfliegen und Insekten verwendet.
Ausstrichmethode. Eine Präparationsmethode, bei der eine leicht zu verteilende biologische Probe auf einen Objektträger aufgetragen wird. Ein Beispiel hierfür ist der Blutausstrich.
④Pressmethode. Das natürliche, leicht dispergierbare Gewebe oder leicht dispergierbare Gewebe nach der Behandlung, wie z. B. tierische Spermatozyten, Wurzelspitzenzellen usw., wird auf den Objektträger gelegt, mit einem Deckglas versehen und dann das Gewebe gewaltsam zerdrückt, so dass sich die Zellen oder intrazellulären Strukturen in einer Schicht aus Filmmethoden verteilen. Die Pressmethode wird häufig verwendet, um Chromosomen zu beobachten, die normalerweise mit Magentaacetat, Flechtenrot und Karbolsäurerot gefärbt werden.
