Messung der Mikrobenmenge – Mikroskopische Direktzählmethode!
Das Wachstum von Bakterienpopulationen ist durch eine Zunahme der Zellzahl bzw. eine Zunahme des Zellmaterials gekennzeichnet. Es gibt verschiedene Methoden zur Messung der Zellzahl, darunter direkte mikroskopische Zählung, Plattenzählung, Turbometrie mittels Spektrophotometer, MPN mit der wahrscheinlichsten Zahl und Membranfiltration. Zu den Methoden zur Messung zellulärer Substanzen gehören die Messung des Zelltrockengewichts, die Messung des Gehalts bestimmter Zellbestandteile wie Stickstoff, RNA und DNA sowie die Messung von Stoffwechselprodukten. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass es viele Methoden zur Messung des mikrobiellen Wachstums gibt, jede mit ihren eigenen Vor- und Nachteilen, und die Auswahl sollte auf den spezifischen Anforderungen der Arbeit basieren. Dieses Experiment stellt hauptsächlich die häufig verwendete Mikroskop-Direktzählmethode in der Produktion und bei wissenschaftlichen Forschungsarbeiten vor.
Zweckanforderungen
1. Erklären Sie das Prinzip der Verwendung eines Blutzellzählbretts zum Zählen.
2. Beherrschen Sie die Methode zur Verwendung eines Blutzellzählbretts zur Mikrobenzählung.
2, Grundprinzipien
Die mikroskopische Direktzählmethode ist eine einfache, schnelle und intuitive Methode zum direkten Zählen einer kleinen Menge einer Probensuspension unter einem Mikroskop, indem sie auf einen speziellen Glasobjektträger mit einer bestimmten Fläche und einem bestimmten Volumen (auch als Bakterienzähler bezeichnet) gelegt wird. Zu den derzeit im In- und Ausland häufig verwendeten Bakterienzählgeräten gehören Blutzellzählplatten, Peteroff-Hauser-Bakterienzählgeräte und Hawksley-Bakterienzählgeräte, die alle zum Zählen von Suspensionen von Hefen, Bakterien, Pilzsporen usw. verwendet werden können. mit dem gleichen Grundprinzip. Die beiden letztgenannten Arten von Bakterienzählern haben ein Gesamtvolumen von {{0}},02 mm3, nachdem sie mit einem Deckglas abgedeckt wurden, und der Abstand zwischen dem Deckglas und dem Trägerobjektträger beträgt nur 0,02 mm. Daher kann ein Ölimmersionsobjektiv verwendet werden, um kleinere Zellen wie Bakterien zu beobachten und zu zählen. Neben der Verwendung dieser Bakterienzähler gibt es auch eine Schätzmethode zur direkten Beobachtung des Verhältnisses von Abstrichfläche zu Feldfläche unter dem Mikroskop, die in der Regel zur bakteriologischen Untersuchung von Milch eingesetzt wird. Die Vorteile der direkten Zählung mit einem Mikroskop sind intuitiv, schnell und einfach zu bedienen. Der Nachteil dieser Methode besteht jedoch darin, dass es sich bei den Messergebnissen meist um die Summe toter und lebender Zellen handelt. Gegenwärtig gibt es einige Methoden, mit denen dieser Nachteil behoben werden kann, z. B. die Kombination einer Kammerkultur zur Färbung lebender Zellen (kurze Zeit) und die Zugabe von Zellteilungshemmern, um das Ziel zu erreichen, nur lebende Zellen zu zählen.
Am Beispiel eines Blutzellzählbretts zur direkten Zählung unter dem Mikroskop. Die Verwendungsmethoden der beiden anderen Bakterienzähler finden Sie in den Anleitungen verschiedener Hersteller. Die direkte Zählung unter dem Mikroskop mit einer Blutzellzählplatte ist eine häufig verwendete Methode zur Mikrobenzählung. Das Zählbrett ist ein speziell angefertigter Glasschieber mit vier Rillen, die darauf drei Plattformen bilden; Die breitere Plattform in der Mitte ist durch eine kurze horizontale Nut in zwei Hälften geteilt, und auf jeder Seite der Plattform befindet sich ein Gitter. Jedes Gitter ist in neun große Gitter unterteilt, und das große Gitter in der Mitte ist der Zählraum. Der Aufbau der Blutzellzählplatte ist in Abbildung l{{0}} dargestellt. Der Maßstab des Zählraums weist im Allgemeinen zwei Spezifikationen auf. Zum einen ist ein großes Quadrat in 25 mittlere Quadrate unterteilt, und jedes Quadrat ist weiter in 16 kleine Quadrate unterteilt (Abbildung 15-2); Eine andere Methode besteht darin, ein großes Quadrat in 16 mittlere Quadrate zu unterteilen und jedes Quadrat weiter in 25 kleine Quadrate zu unterteilen. Unabhängig von der Größe des Zählbretts gibt es jedoch in jedem großen Quadrat 400 kleine Quadrate. Wenn die Seitenlänge jedes Quadrats 1 mm beträgt, beträgt die Fläche jedes großen Quadrats 1 mm2. Nach dem Abdecken mit einem Deckglas beträgt die Höhe zwischen Deckglas und Objektträger 0,1 mm, sodass das Volumen des Zählraums 0,1 mm3 (ein Tausendstel Milliliter) beträgt. Abbildung 15-1 Struktur der Blutzellen-Zähltafel (I) Abbildung 15-2 Struktur der Blutzellen-Zähltafel (II) A Vorderansicht; B. Vertikale Schnittansicht; Das vergrößerte Gitter hat in der Mitte ein großes Quadrat als Zählraum 1. Blutzellenzählbrett; 2. Abdeckglas; Bei der Zählung im Zählraum wird die Gesamtkeimzahl üblicherweise für fünf Quadrate berechnet, dann wird der Durchschnittswert jedes Quadrats ermittelt, mit 25 oder 16 multipliziert, um die Gesamtkeimzahl in einem großen Quadrat zu erhalten, die dann in umgerechnet wird Gesamtkeimzahl in der 1-ml-Bakterienlösung. Angenommen, die Gesamtkeimzahl in fünf quadratischen Gittern ist A und der Verdünnungsfaktor der Bakterienlösung ist B. Wenn es 25 Zählplatten im quadratischen Gitter gibt, beträgt die Gesamtkeimzahl in 1 ml Bakterienlösung A/5 × 25 × 104 × B=50000A · B. Wenn das quadratische Gitter 16 Zählplatten enthält, beträgt die Gesamtkeimzahl in 1 ml Bakterienlösung entsprechend A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
