Einführung in die Vor- und Nachteile des Multiphotonen-Laser-Scanning-Mikroskops
Vorteile der Multiphotonen-Laser-Scanning-Mikroskopie:
1. Bei Anregung durch rotes Licht oder Infrarotlicht ist die Lichtstreuung gering und die Streuung kleiner Partikel ist umgekehrt proportional zur vierten Potenz der Wellenlänge.
2. Mehr gestreute Photonen aus dem Bildgebungsabschnitt können ohne Löcher gesammelt werden.
3. Die Lochblende kann die gestreuten Photonen, die vom unscharfen Bereich oder vom Fokusbereich emittiert werden, nicht unterscheiden, und das Signal-Rausch-Verhältnis der Mehrphotonenbildgebung in tiefen Schichten ist gut.
4. Das zur Einzelphotonenanregung verwendete ultraviolette oder sichtbare Licht wird von der Probe leicht absorbiert und abgeschwächt, bevor der Strahl die Brennebene erreicht, und es ist nicht einfach, tiefe Schichten anzuregen.
5. Im Hinblick auf die Beobachtung mit dem biologischen Mikroskop besteht die erste Überlegung darin, den aktiven Zustand des Organismus selbst nicht zu beeinträchtigen und die Zirkulation von Wasser, Ionenkonzentration, Sauerstoff und Nährstoffen aufrechtzuerhalten. Bei der Lichtbeobachtung müssen sowohl Wärme als auch Photonenenergie innerhalb der Bestrahlungsmenge und Lichtenergie bleiben, die die Zellen nicht schädigt.
6. Die Multiphotonenmikroskopie hat viele Vorteile. Wie dreidimensionale Auflösung, Tiefeneindringung, Streueffizienz, Hintergrundlicht, Signal-Rausch-Verhältnis, Steuerung usw. weisen sie alle Eigenschaften auf, die frühere Lasermikroskope nicht hatten oder nicht übertreffen konnten.
Nachteile der Multiphotonen-Laser-Scanning-Mikroskopie:
1. Nur für Fluoreszenzbildgebung.
2. Wenn die Probe Chromophore enthält, die Anregungslicht absorbieren, kann die Probe thermisch beschädigt werden.
3. Die Auflösung ist leicht reduziert. Durch die gleichzeitige Nutzung der konfokalen Blende lässt sich zwar eine Verbesserung erzielen, allerdings geht das Signal verloren.
4. Aufgrund der Einschränkungen teurer Ultrakurzpulslaser sind die Kosten für Multiphotonen-Rastermikroskope relativ hoch.
