Bildgebende Methoden des Hell--Feldes und des Dunkel--Feldes in der Fluoreszenzmikroskopie
(1) Bright-Field-Imaging-Methode (BFI), die es dem durchgelassenen Elektronenstrahl nur im paraxialen Bereich ermöglicht, durch die Objektivapertur zu gelangen und so ein dunkles Bild auf einem hellen Hintergrund zu erzeugen. Je kleiner die Apertur des Objektivs ist, desto größer ist der Kontrast des Hellfeldbildes; (2) Dunkelfeldbildgebung (DFI) ist eine Technik, die nur einen Teil des Großwinkelstreustrahls oder einen bestimmten Beugungsstrahl des Kristalls durch die Objektivöffnung passieren lässt, während der durchgelassene Strahl blockiert wird. Dadurch entsteht ein helles grafisches Bild auf dunklem Hintergrund. Dieses Dunkelfeld-Bildgebungsverfahren kann den Kontrast von Bildern verbessern und ist ein wichtiges Bildgebungsverfahren.
Es gibt ungefähr vier Methoden, um Dunkelfeldbilder mit Leica-Fluoreszenzmikroskopen zu erhalten: (1) Beibehaltung der vertikalen Beleuchtung entlang der optischen Achse, während die Objektivapertur bewegt wird; (2) Die Verwendung schräger Beleuchtung zur Erfassung gestreuter Strahlen in Richtung der optischen Achse wird als Central Dark Field Imaging (CDFI) bezeichnet. (3) Eine Objektivapertur mit einer zentralen Strahlblende und einem kreisförmigen transparenten Bereich; (4) Verwenden Sie eine kreisförmige transparente Kondensorlinse zur Lichterfassung und eine zentrale kreisförmige Blende für die Objektivlinse. Die *-Methode ist hier die einfachste, verwendet jedoch elektronische Bildgebung im distalen Hülsenbereich, sodass die Aberration groß und die Bildqualität nicht sehr gut ist. Mit der zweiten Methode können die oben genannten Nachteile vermieden werden, allerdings empfängt die Objektivöffnung des Leica-Fluoreszenzmikroskops nur einen kleinen Teil der gestreuten gebeugten Elektronen, was zu einer geringeren Effizienz führt. Die Seite der Blende ist häufig starkem Elektronenbeschuss ausgesetzt, der leicht zu asymmetrischer Verschmutzung führen und die Bildqualität beeinträchtigen kann. Die ringförmige Objektivlinse wurde in dieser Hinsicht verbessert, der Nachteil besteht jedoch darin, dass sie schwierig herzustellen ist und es schwierig ist, eine vollständige Axialsymmetrie zu erreichen. Angesichts der relativ geringen Anforderungen an das Beleuchtungssystem kann die letztere Lösung übernommen werden, die das Hinzufügen einer ringförmigen Blende am Kondensor beinhaltet, um eine Hohlstrahlbeleuchtung für die Probe bereitzustellen. Die Wirkung dieses Geräts. Seine Bildauflösung kann nahe an die von Hellfeldbildern heranreichen, während der Kontrast deutlich verbessert wird.
