Bildgebende Verfahren für Hell- und Dunkelfelder der Fluoreszenzmikroskopie
(1) Hellfeldbildgebung (BFI), die nur den übertragenen Elektronen im paraxialen Bereich den Durchtritt durch die Objektivöffnung ermöglicht und so ein dunkles Bild auf einem hellen Hintergrund erzeugt. Je kleiner die Blende des Objektivs ist, desto größer ist der Kontrast des Hellfeldbildes; (2) Dunkelfeldbildgebung (DFI), die nur einen Teil eines Großwinkelstreustrahls oder eines Beugungsstrahls eines Kristalls durch die Objektivlinsenöffnung passieren lässt, während der durchgelassene Strahl blockiert wird. Dadurch entsteht ein helles grafisches Bild auf dunklem Hintergrund. Dieses Dunkelfeld-Bildgebungsverfahren kann den Kontrast von Bildern verbessern und ist ein wichtiges Bildgebungsverfahren.
Es gibt ungefähr vier Methoden für die Fluoreszenzmikroskopie, um eine Dunkelfeldabbildung zu erreichen: (1) Aufrechterhaltung der vertikalen Beleuchtung entlang der optischen Achse, während die Objektivapertur bewegt wird; (2) Die Verwendung schräger Beleuchtung zur Erzeugung gestreuter Strahlen in Richtung der optischen Achse wird als Center Dark Field Imaging (CDFI) bezeichnet. (3) Eine Objektivlinsenöffnung mit einer zentralen Strahlblockierung und einem kreisförmigen transparenten Bereich; (4) Verwenden Sie einen kreisförmigen transparenten Scheinwerfer zur Lichterfassung und eine Objektivöffnung mit einem zentralen kreisförmigen Loch. Die *-Methoden hier sind einfach und praktisch, nutzen jedoch elektronische Bildgebung im entfernten Ärmelbereich, was zu großen Aberrationen und schlechter Bildqualität führt. Mit der zweiten Methode können die oben genannten Nachteile vermieden werden, allerdings empfängt die Objektivöffnung des Leica-Fluoreszenzmikroskops nur einen kleinen Teil der gestreuten gebeugten Elektronen, was zu einer geringeren Effizienz führt. Die Seite der Blende wird häufig von einer großen Anzahl von Elektronen bombardiert, was leicht zu asymmetrischer Verschmutzung führen und die Bildqualität beeinträchtigen kann. Das kreisförmige Objektiv wurde in dieser Hinsicht verbessert, der Nachteil besteht jedoch darin, dass es schwierig herzustellen ist und es schwierig ist, eine vollständige Axialsymmetrie zu erreichen. Angesichts der relativ geringen Anforderungen an das Beleuchtungssystem kann die letztere Lösung übernommen werden, die das Hinzufügen einer kreisförmigen Blende am Kondensor beinhaltet, um eine Hohlraumbeleuchtung für die Probe bereitzustellen. Die Wirkung dieses Geräts. Seine Bildauflösung kann nahe an die von Hellfeldbildern heranreichen, während der Kontrast deutlich verbessert wird.
