So wählen Sie das passende Fluoreszenzmikroskop aus
Das Fluoreszenzmikroskop ist ein standardmäßiges mikroskopisches Bildgebungsgerät in Labors und Pathologieabteilungen, das Fluoreszenzeigenschaften zur Beobachtung und Bildgebung nutzt. Es wird häufig in verschiedenen Bereichen wie der Zellbiologie, Neurobiologie, Botanik, Mikrobiologie, Pathologie, Genetik usw. eingesetzt. Die Fluoreszenzbildgebung hat den Vorteil einer hohen Empfindlichkeit und Spezifität und eignet sich daher sehr gut für die Beobachtung der Verteilung spezifischer Proteine, Organellen usw . in Geweben und Zellen, Untersuchung von Co-Lokalisierung und Wechselwirkungen, Verfolgung lebensdynamischer Prozesse wie Änderungen der Ionenkonzentration usw.
Auswahl an Mikroskopen
Fluoreszenzmikroskope werden hauptsächlich in drei Kategorien unterteilt: aufrechte Fluoreszenzmikroskope (geeignet zum Schneiden), inverse Fluoreszenzmikroskope (geeignet für lebende Zellen und auch zum Schneiden) und Stereofluoreszenzmikroskope (geeignet für größere Proben wie Pflanzen, Zebrafische (erwachsene/ embryonal), Medaka, Maus-/Rattenorgane usw.).
Auswahl an Fluoreszenzfilterblöcken
Bei der Auswahl der Filterblöcke sollten nicht nur die Anregungs- und Emissionswellenlängen von Fluoreszenzsonden berücksichtigt werden, sondern auch berücksichtigt werden, ob eine unspezifische Anregung vorliegt und ob bei mehrfarbig markierten Proben Farbübersprechen auftritt. Im Experiment werden wir für die Anregung möglichst die Wellenlänge wählen, die dem Anregungspeak am nächsten liegt, und der Empfangsbereich sollte die Peakemission umfassen. Der Anregungspeak von Alexa Fluor 488 liegt bei 500 nm, und in einem Fluoreszenzmikroskop kann ein 480/40-Anregungsfilter ausgewählt werden. Die in der Fluoreszenzmikroskopie häufig verwendeten Fluoreszenzfilterblöcke können in zwei Typen unterteilt werden: Langpass (LP) und Bandpass (BP), die ebenfalls entsprechend den Anforderungen ausgewählt werden müssen.
Konfokales Mikroskop
Bei herkömmlichen Fluoreszenzmikroskopie-Beobachtungen sind diese aufgrund der Überlappung fluoreszierend markierter Substanzen und spontaner Fluoreszenzstrukturen eng miteinander verbunden. Herkömmliche Objektive für fallende Fluoreszenzmikroskopie sammeln jedoch nicht nur Licht aus der Brennebene, sondern streuen das Licht auch in der Brennebene nach oben und unten, was zu einer erheblichen Verringerung der Bildauflösung und des Kontrasts führt.
Die konfokale Bildgebung erfasst nur das von der selbstfokussierenden Ebene reflektierte Licht und löst so das oben genannte Problem. Die Lichtquelle bildet durch eine Lochblende einen kleinen und feinen Fleck auf der Brennebene, und das von der Brennebene emittierte Licht wird durch die Objektivlinse gesammelt. Der Großteil der Fluoreszenz, die von Punkten oberhalb oder unterhalb der Brennebene der Objektivlinse emittiert wird, kann nicht zur Lochblende konvergieren. Nur die in der Brennebene befindliche Fluoreszenz und ein kleiner Teil der defokussierten Fluoreszenz können durch die Lochblende gelangen, während der Lichtstrahl außerhalb der Brennebene vor oder hinter der Lochblende konvergiert und daran gehindert wird, durch die Lochblende in den Detektor einzudringen. Das erkannte Bild stammt aus der Brennebene, sodass die endgültige Bildqualität erheblich verbessert wird.
Aufgrund der vielfältigen Vorteile und der praktischen Anwendbarkeit der konfokalen Laser-Scanning-Mikroskopie ist sie derzeit ein unverzichtbarer experimenteller Assistent in den Bereichen hochpräzise Zellbiologie, Botanik und Zellforschung. Gleichzeitig wird es in zukünftigen wissenschaftlichen Forschungszentren das grundlegendste und wichtigste Forschungsinstrument sein.
