Wie wählt man zwischen einem inversen Mikroskop und einem Fluoreszenzmikroskop?
Das Mikroskop ist ein wichtiges Instrument in der Zellkultur und damit verbundenen abgeleiteten Experimenten. Derzeit gibt es verschiedene Arten von Mikroskopen auf dem Markt, und die Auswahl eines Mikroskops, das den Anforderungen entspricht und geeignet ist, ist eine Herausforderung. Im Folgenden stellen wir die Prinzipien von inversen Mikroskopen und Fluoreszenzmikroskopen vor, aus denen jeder wählen kann.
Das inverse Mikroskop besteht wie ein normales Mikroskop hauptsächlich aus drei Teilen: mechanischem Teil, Beleuchtungsteil und optischem Teil. Der Aufbau eines inversen Mikroskops ist der gleiche wie der eines normalen aufrechten Mikroskops, mit der Ausnahme, dass die Objektivlinse und das Beleuchtungssystem umgekehrt sind, wobei ersteres unter dem Tisch und letzteres über dem Tisch liegt. Dieser Aufbau vergrößert den effektiven Abstand zwischen dem Beleuchtungsstrahlersystem und der Bühne erheblich und erleichtert so die Platzierung dickerer Beobachtungsgeräte wie Kulturschalen und Zellkulturflaschen (selbstverständlich können auch Glasobjektträger verwendet werden), während der Arbeitsabstand zwischen den Das Objektiv und das Material müssen nicht sehr groß sein. Inverse Mikroskope werden von medizinischen und gesundheitlichen Einrichtungen, Universitäten und Forschungsinstituten zur Beobachtung von Mikroorganismen, Zellen, Bakterien, Gewebekulturen, Suspensionen, Sedimenten usw. verwendet. Es kann den Prozess der Zell- und Bakterienproliferation und -teilung im Kulturmedium kontinuierlich beobachten kann jede Form dieses Prozesses erfassen. Weit verbreitet in Bereichen wie Zytologie, Parasitologie, Onkologie, Immunologie, Gentechnik, industrielle Mikrobiologie und Botanik.
Mithilfe der Fluoreszenzmikroskopie werden die Absorption, der Transport, die Verteilung und die Lokalisierung von Substanzen innerhalb von Zellen untersucht. Für das getestete Objekt gibt es zwei Möglichkeiten, Fluoreszenz zu erzeugen: spontane Fluoreszenz, die direkt durch ultraviolette Strahlung emittiert wird; Sekundäre Fluoreszenz tritt auf, wenn das beobachtete Objekt mit fluoreszierenden Farbstoffen behandelt und ultraviolettem Licht ausgesetzt wird, bevor es Fluoreszenz emittiert. Einige Substanzen in Zellen, wie zum Beispiel Chlorophyll, erzeugen spontane Fluoreszenz, nachdem sie ultravioletter Strahlung ausgesetzt wurden; Einige Substanzen selbst emittieren möglicherweise keine Fluoreszenz, können aber bei Anfärbung mit Fluoreszenzfarbstoffen oder fluoreszierenden Antikörpern unter ultravioletter Strahlung auch sekundäre Fluoreszenz emittieren. Ein Fluoreszenzmikroskop verwendet eine Punktlichtquelle mit hoher Lichtausbeute, um eine bestimmte Lichtwellenlänge (UV 365 nm oder UV-Blau 420 nm) durch ein Farbfiltersystem als Anregungslicht zu emittieren, das die fluoreszierenden Substanzen in der Probe zur Emission verschiedener Fluoreszenzfarben anregt. Anschließend erfolgt die Beobachtung durch Vergrößerung des Objektivs und des Okulars. Auf diese Weise ist es auch bei schwacher Fluoreszenz gut erkennbar und vor stark kontrastreichen Hintergründen hochempfindlich. Es wird hauptsächlich zur Untersuchung der Zellstruktur, -funktion und der chemischen Zusammensetzung verwendet.
Die Fluoreszenzmikroskopie kann in zwei Typen unterteilt werden: Transmissionsmikroskopie und Fallmikroskopie. Ersteres ist primitiver, während letzteres fortgeschrittener ist. Der Grundaufbau der beiden Arten von Fluoreszenzmikroskopen ist ähnlich, der Hauptunterschied besteht darin, dass das durchgelassene Anregungslicht durch die Probe geht und insgesamt Fluoreszenz erzeugt. Die Fluoreszenz gelangt dann in die Objektivlinse und je höher die Vergrößerung, desto schwächer ist die Fluoreszenz; Das einfallende Anregungslicht projiziert auf die Oberfläche der Probe und erzeugt Fluoreszenz, die in die Objektivlinse eindringt. Je höher die Vergrößerung, desto stärker ist die Fluoreszenz, wodurch es sich für Hochleistungsbeobachtungen eignet. Zu den Hauptkomponenten eines Fluoreszenzmikroskops gehören eine Quecksilberlampen-Lichtquelle, eine Anregungsfilterplatte, ein Spektrophotometer (Tropfentyp), eine Unterdrückungsfilterplatte und ein Dunkelfeldkondensor (Transmissionstyp). Aufgrund der starken Erwärmung von Quecksilberlampen sind die meisten von ihnen außerdem mit wärmeabsorbierenden Filtern ausgestattet. Einige Fluoreszenzmikroskope verfügen außerdem über ein Phasenkontrastobjektiv und eine kreisförmige Apertur, was eine Phasenkontrastbeobachtung ermöglicht. Einige Fluoreszenzmikroskope verfügen über eine umgekehrte Struktur, die ebenfalls ein inverses Mikroskop ist, und so weiter.
Darüber hinaus können die oben genannten Mikroskope durch den Einbau eines CCD, der die vom Mikroskop gesehenen physischen Bilder in digitale analoge Bilder umwandelt und diese auf einem Computer abbildet, zu digitalen Mikroskopen zusammengebaut werden. Dadurch können wir unsere Forschung im Mikrobereich von der traditionellen binokularen Beobachtung auf die Reproduktion durch Displays verlagern und so die Arbeitseffizienz verbessern.
