Wie sich die Fluoreszenzmikroskopie von der konfokalen Lasermikroskopie unterscheidet
Fluoreszenzmikroskop
1. Ein Fluoreszenzmikroskop verwendet ultraviolettes Licht als Lichtquelle und bestrahlt das zu untersuchende Objekt, sodass es fluoresziert. Anschließend können die Form und Lage des Objekts unter dem Mikroskop beobachtet werden. Ein Fluoreszenzmikroskop wird verwendet, um die Absorption, den Transport, die Verteilung und die Lokalisierung chemischer Substanzen in Zellen zu untersuchen. Einige Substanzen in der Zelle, wie beispielsweise Chlorophyll, können nach Bestrahlung mit ultraviolettem Licht fluoreszieren. Es gibt einige Substanzen, die nicht von selbst fluoreszieren können, aber wenn sie mit fluoreszierenden Farbstoffen oder fluoreszierenden Antikörpern angefärbt werden, können sie nach Bestrahlung mit ultraviolettem Licht ebenfalls fluoreszieren. Die Fluoreszenzmikroskopie ist eines der Werkzeuge zur qualitativen und quantitativen Untersuchung dieser Art von Substanzen.
2, Fluoreszenzmikroskop Prinzip:
(A) Lichtquelle: Die Lichtquelle strahlt Licht verschiedener Wellenlängen (vom Ultravioletten bis zum Infraroten) aus.
(B) Filter der Anregungsquelle: Durch die Probe kann Fluoreszenzlicht einer bestimmten Wellenlänge erzeugt werden, während das zur Anregung der Fluoreszenz unnütze Licht blockiert wird.
(C) Fluoreszierende Probe: im Allgemeinen mit einem Fluorochrom gefärbt.
(D) Sperrfilter: Sie blockieren das Anregungslicht, das nicht von der Probe absorbiert wird, um die Fluoreszenz selektiv durchzulassen, wobei auch einige Wellenlängen der Fluoreszenz selektiv durchgelassen werden. Ein Mikroskop, das ultraviolettes Licht als Lichtquelle verwendet, um das bestrahlte Objekt zum Fluoreszieren zu bringen. Das Elektronenmikroskop wurde erstmals 1931 in Berlin von Knorr und Haroska entwickelt. Dieses Mikroskop verwendet anstelle eines Lichtstrahls einen Hochgeschwindigkeitselektronenstrahl. Da die Wellenlänge des Elektronenstrahls viel kürzer als die Lichtwelle ist, kann die Vergrößerung des Elektronenmikroskops bis zu 800,000 Mal betragen, wobei die Auflösung auf mindestens 0,2 Nanometer begrenzt ist. 1963 begann man mit der Verwendung des Rasterelektronenmikroskops, mit dem man winzige Strukturen auf der Oberfläche eines Objekts erkennen kann.
3. Anwendungsbereich: Wird verwendet, um das Bild winziger Objekte zu vergrößern. Wird allgemein in der Biologie, Medizin, bei mikroskopischen Partikeln und anderen Beobachtungen verwendet.
Konfokales Mikroskop
1. Konfokalmikroskope haben eine halbreflektierende Halblinse, die das reflektierte Licht in verschiedene Richtungen lenkt und es in eine Blende mit einer Lochblende bündelt. Die Lochblende befindet sich im Brennpunkt, hinter der Blende befindet sich ein Photomultiplier. Man kann sich vorstellen, dass das reflektierte Licht vor und nach dem Brennpunkt des Detektors durch dieses konfokale System nicht auf die kleine Lochblende fokussiert werden kann und durch die Blende blockiert wird. Das Photometer misst also die Intensität des reflektierten Lichts im Brennpunkt.
2. Prinzip: Das herkömmliche optische Mikroskop verwendet eine Feldlichtquelle. Das Bild jedes Punkts auf der Probe wird durch Beugung oder Streuung des Lichts von benachbarten Punkten gestört. Das konfokale Laser-Scan-Mikroskop verwendet einen Laserstrahl, der durch eine Beleuchtungsblende geleitet wird, um eine punktförmige Lichtquelle auf der Probe zu erzeugen. In der Brennebene wird jeder Punkt auf der Probe gescannt und die Probe wird bestrahlt. Bei der Bildgebung wird die Blende erkannt. Durch die Erkennung der Blende wird die Lichtintensität Punkt für Punkt oder Zeile für Zeile durch einen Photomultiplier (PMT) oder ein kaltes Elektrokopplungsgerät (cCCD) gemessen. Das cCCD empfängt Punkt für Punkt oder Zeile für Zeile ein fluoreszierendes Bild auf dem Bildschirm des Computermonitors. Die Beleuchtungs- und Detektionslochblende sind in Bezug auf die Brennebene der Objektivlinse konjugiert. Punkte in der Brennebene werden gleichzeitig auf die Beleuchtungs- und Emissionslochblende fokussiert. Punkte außerhalb der Brennebene werden bei der Abbildung nicht in die Detektionslochblende aufgenommen. Das konfokale Bild stellt den optischen Querschnitt der Probe dar und überwindet die Mängel der unscharfen Bilder gewöhnlicher Mikroskope.
3. Anwendungsgebiete: Medizin, Tier- und Pflanzenforschung, Biochemie, Bakteriologie, Zellbiologie, Gewebeembryologie, Lebensmittelwissenschaft, Genetik, Pharmakologie, Physiologie, Optik, Pathologie, Botanik, Neurowissenschaft, Meeresbiologie, Materialwissenschaft, Elektronik, Mechanik, Erdölgeologie, Mineralogie.
