Fähigkeiten und Methoden der Fluoreszenzmikroskopie
Technische Parameter des Fluoreszenzmikroskops 1. Weitwinkelokular 2. Achromatische Objektivlinse 3. Vierloch-Objektivlinsenkonverter 4. Epi-Fluoreszenzgerät Blaues (B) Grünes (G) Anregungssystem 100-W-Quecksilberlampe 5. Koaxialer Grob- und Feinfokus-Einstellmechanismus: Fokusbereich einstellen: 15 mm Mikrobewegungsrasterwert: 0,002 mm 6. Doppelschichtiger mechanischer Tisch Längsbewegungsbereich: 70 mm Seitlicher Bewegungsbereich: 50 mm
Technische Parameter des Fluoreszenzmikroskops
1. Weitwinkelokular
2. Achromatische Objektivlinse
3. Objektivrevolver mit vier Blenden
4. Epi-Fluoreszenzgerät, blaues (B), grünes (G) Anregungssystem, 100-W-Quecksilberlampe
5. Koaxialer Grob- und Feinfokus-Einstellmechanismus: Fokusbereich 15 mm, Feinbewegungsrasterwert 0,002 mm
6. Doppelschichtige mechanische Werkbank
Vertikaler Bewegungsbereich: 70 mm. Seitlicher Bewegungsbereich: 50 mm
Fähigkeiten und Methoden der Fluoreszenzmikroskopie
(1) Glasobjektträger
Die Dicke des Glasobjektträgers sollte zwischen 0,8 und 1,2 mm liegen. Ein zu dicker Objektträger absorbiert einerseits mehr Licht, andererseits kann das Anregungslicht nicht auf die Probe konzentriert werden. Die Objektträger müssen glatt, gleichmäßig dick und frei von offensichtlicher Autofluoreszenz sein. Manchmal werden Objektträger aus Quarzglas verwendet.
(2) Abdeckglas
Die Dicke des Deckglases beträgt etwa 0,17 mm, glatt. Um das Anregungslicht zu verstärken, kann auch ein Interferenz-Deckglas verwendet werden, bei dem es sich um ein spezielles Deckglas handelt, das mit mehreren Schichten von Substanzen (z. B. Magnesiumfluorid) beschichtet ist, die unterschiedliche Interferenzeffekte auf Licht unterschiedlicher Wellenlänge haben, wodurch das Fluoreszenz verläuft reibungslos. Anregungslicht wird durchgelassen und reflektiert, und dieses reflektierte Anregungslicht regt die Probe an.
(3) Probe
Gewebeschnitte oder andere Proben sollten nicht zu dick sein. Ist sie zu dick, wird der Großteil des Anregungslichts im unteren Teil der Probe verbraucht, während der obere direkt von der Objektivlinse beobachtete Teil nicht vollständig angeregt wird. Darüber hinaus beeinflussen Zellüberlappungen oder Verunreinigungen die Beurteilung.
(4) Montagemittel
Glycerin wird üblicherweise als Befestigungsmittel verwendet, das keine Autofluoreszenz aufweisen darf, farblos und transparent ist und die Helligkeit der Fluoreszenz bei pH 8,5-9,5 heller ist und nicht leicht schnell verblasst. Daher wird üblicherweise eine gleiche Mischung aus Glycerin und 0,5 mol/l Carbonatpufferlösung mit einem pH-Wert von 9,{6}} bis 9,5 als Montagemittel verwendet.
(5) Spiegelöl
Im Allgemeinen muss bei der Beobachtung von Proben mit Dunkelfeld-Fluoreszenzmikroskopen und Ölimmersions-Immersionsobjektiven Immersionsöl verwendet werden. Am besten verwenden Sie spezielles, nicht fluoreszierendes Immersionsöl. Alternativ kann auch das oben genannte Glycerin und auch flüssiges Paraffin verwendet werden, allerdings ist der Brechungsindex niedrig, was sich geringfügig auf die Bildqualität auswirkt. Beeinflussen.
