Prinzipien und strukturelle Merkmale der Fluoreszenzmikroskopie
Bei der Fluoreszenzmikroskopie wird ein Punkt mit hoher Lumineszenzeffizienz verwendet. Durch die Filterung des Farbsystems wird Licht einer bestimmten Wellenlänge (z. B. Ultraviolett 3650 oder Violettblau 4200) als Anregungslicht emittiert. Das fluoreszierende Material in der Probe wird angeregt und emittiert eine Vielzahl unterschiedlicher Fluoreszenzfarben, die dann zur Betrachtung durch Objektiv und Okular vergrößert werden. Auf diese Weise ist die Fluoreszenz vor einem kontrastreichen Hintergrund, selbst wenn sie sehr schwach ist, leicht zu erkennen. Die hohe Empfindlichkeit wird hauptsächlich zur Untersuchung der Zellstruktur und -funktion sowie der chemischen Zusammensetzung verwendet. Die Grundstruktur eines Fluoreszenzmikroskops besteht aus einem gewöhnlichen optischen Mikroskop und einigen Zubehörteilen (z. B. einer Fluoreszenzlichtquelle, Anregungsfiltern, Zweifarben-Strahlteilern und Sperrfiltern usw.). Fluoreszierende Lichtquelle – im Allgemeinen wird eine Ultrahochdruck-Quecksilberlampe (6 W) verwendet, die Licht verschiedener Wellenlängen emittieren kann. Jedes fluoreszierende Material hat jedoch eine stärkste Fluoreszenzanregungswellenlänge, sodass ein Anregungsfilter (im Allgemeinen Ultraviolett-, Violett-, Blau- und Grünfilter) hinzugefügt werden muss, damit nur eine bestimmte Wellenlänge des Anregungslichts durch die Probe gelangt und das andere Licht absorbiert wird. Daher muss ein Anregungsfilter (im Allgemeinen Ultraviolett-, Violett-, Blau- und Grünfilter) hinzugefügt werden, damit nur eine bestimmte Wellenlänge des Anregungslichts durch die Probe gelangt und das andere Licht absorbiert wird. Wenn jede Substanz mit Anregungslicht bestrahlt wird, emittiert sie innerhalb kürzester Zeit sichtbare Fluoreszenz mit einer längeren Wellenlänge als das bestrahlte Licht. Die Fluoreszenz ist spezifisch und im Allgemeinen schwächer als das Anregungslicht. Um die spezifische Fluoreszenz beobachten zu können, muss die Objektivlinse, die mit einem Blockierungs- (oder Unterdrückungs-)mittel versehen ist, ausgewählt werden.
Unterschied zwischen Fluoreszenzmikroskop und gewöhnlichem Mikroskop
1. Die Beleuchtungsmethode ist normalerweise fallend, d. h. die Lichtquelle wird durch die Objektivlinse auf die Probe projiziert.
2. Die Lichtquelle ist ultraviolettes Licht mit einer kürzeren Wellenlänge und einem höheren Auflösungsvermögen als bei gewöhnlichen Mikroskopen.
3. Es gibt zwei Spezialfilter: Der vor der Lichtquelle dient zum Herausfiltern des sichtbaren Lichts und der zwischen Okular und Objektivlinse dient zum Herausfiltern des ultravioletten Lichts, um das menschliche Auge zu schützen.
Das Fluoreszenzmikroskop ist auch eine Art optisches Mikroskop. Der Hauptunterschied besteht darin, dass die Anregungswellenlänge beider Mikroskope unterschiedlich ist. Dies bestimmt den Aufbau und die Verwendungsmethoden des Fluoreszenzmikroskops und des gewöhnlichen optischen Mikroskops.
Das Fluoreszenzmikroskop ist das grundlegende Werkzeug für die Immunfluoreszenzzytochemie. Es besteht aus einer Lichtquelle, einem Filterplattensystem und einem optischen System sowie weiteren Hauptkomponenten. Es verwendet eine bestimmte Wellenlänge des Lichts, um die Probe zur Fluoreszenz anzuregen. Diese wird durch die Objektivlinse und das Okularsystem vergrößert, um das Fluoreszenzbild der Probe zu beobachten.
