Anforderungen an die Probenvorbereitung für Fluoreszenzmikroskope
(i) Folien
Die Dicke des Objektträgers sollte zwischen 0,8 und 1,2 mm liegen. Zu dicke Abhänge absorbieren einerseits mehr Licht und können andererseits die Lichtanregung in der Probe verhindern. Der Objektträger muss glatt und gleichmäßig dick sein und darf keine offensichtliche Autofluoreszenz aufweisen. Manchmal müssen Objektträger aus Quarzglas verwendet werden.
(ii) Deckglas
Deckgläser sind etwa 0,17 mm dick und glatt. Um das Anregungslicht zu verstärken, können auch Interferenzen mit dem Deckglas verwendet werden. Dabei handelt es sich um eine spezielle Oberfläche, die mit mehreren Schichten unterschiedlicher Wellenlängen beschichtet ist. Die Interferenzen von Substanzen (wie Magnesiumfluorid) spielen eine unterschiedliche Rolle bei der Wirkung von Lichtinterferenzen auf das Deckglas, wodurch die Fluoreszenz durch die glatte Oberfläche reflektiert und das Anregungslicht reflektiert wird. Die Reflexion des Anregungslichts kann zur Anregung der Probe führen.
(C) Proben
Gewebeschnitte oder andere Proben dürfen nicht zu dick sein, da bei zu dicker Probe das Anregungslicht hauptsächlich im unteren Teil der Probe verbraucht wird und die Objektivlinse im oberen Teil die unzureichende Anregung direkt beobachtet. Darüber hinaus können sich Zellen überlappen oder Verunreinigungen maskieren, was die Beurteilung beeinträchtigt.
(D) Dichtungsmittel
Als Versiegelungsmittel wird üblicherweise Glycerin verwendet. Es darf keine Autofluoreszenz aufweisen und muss farblos und transparent sein. Die Fluoreszenz ist bei einem pH-Wert von 8,5 bis 9,5 heller und verblasst nicht so schnell. Daher wird für Versiegelungsmittel üblicherweise eine Mischung aus Glycerin und einem Carbonatpuffer mit einem pH-Wert von 9,5 bis 9,5 in gleicher Menge verwendet.
(E) Spiegelöl
Bei der allgemeinen Beobachtung von Proben mit einem Dunkelfeld-Fluoreszenzmikroskop und einem Ölspiegel muss Spiegelöl verwendet werden. * Es empfiehlt sich, ein spezielles, nicht fluoreszierendes Spiegelöl zu verwenden. Anstelle des oben genannten Glycerins kann auch flüssiges Paraffin verwendet werden. Der Brechungsindex ist jedoch niedriger und die Bildqualität wird leicht beeinträchtigt.
