Experimentelle Grundlagen der mikrobiellen Mikroskopie - Direktzählmethode
Das direkte Zählen unter dem Mikroskop mithilfe eines Hämozytometers ist eine häufig verwendete Methode zum Zählen von Mikroorganismen. Der Vorteil dieser Methode besteht darin, dass sie intuitiv und schnell ist. Geben Sie die entsprechend verdünnte Bakteriensuspension (oder Sporensuspension) in die Zählkammer zwischen Objektträger und Deckglas des Hämozytometers und zählen Sie sie unter dem Mikroskop. Da das Volumen der Zählkammer fest ist (0,1 mm2), kann es anhand der unter dem Mikroskop beobachteten Anzahl von Mikroorganismen in die Gesamtzahl der Mikroorganismen pro Volumeneinheit umgerechnet werden. Da bei dieser Methode die Gesamtzahl der lebenden und toten Bakterien gezählt wird, wird sie auch als Gesamtbakterienzählmethode bezeichnet.
Ein Hämozytometer ist normalerweise ein spezieller Objektträger mit vier Schlitzen, die drei Plattformen bilden. Die mittlere Plattform ist durch eine kurze horizontale Rille in zwei Hälften geteilt. Auf jeder Seite der Plattform ist ein quadratisches Gitter eingraviert. Jedes quadratische Gitter ist in neun große Quadrate unterteilt. Das große Quadrat in der Mitte ist der Zählraum. Die Zählung der Mikroorganismen erfolgt in der Zählkammer. Der Aufbau des Hämozytometers ist in Abbildung Ⅷ-1 dargestellt.
Die Skala der Zählkammer hat im Allgemeinen zwei Spezifikationen. Eine ist ein großes Quadrat, das in 16 mittelgroße Quadrate unterteilt ist, und jedes mittelgroße Quadrat ist in 25 kleine Quadrate unterteilt (Abbildung Ⅷ-2); das andere ist ein großes Quadrat. Das quadratische Gitter ist in 25 mittelgroße Quadrate unterteilt, und jedes mittelgroße Quadrat ist in 16 kleine Quadrate unterteilt (Abbildung VIII-1, C). Unabhängig von der Art der Zähltafel ist die Anzahl der kleinen Quadrate in jedem großen Quadrat gleich, d. h. 16 × 25=400 kleine Quadrate, wie in Abbildung Ⅷ-2 dargestellt.
Die Seitenlänge jedes großen Quadrats beträgt 1 mm, daher beträgt die Fläche jedes großen Quadrats 1 mm2. Nachdem das Deckglas abgedeckt ist, beträgt die Höhe zwischen dem Objektträger und dem Deckglas 0,1 mm, daher beträgt das Volumen der Zählkammer 0,1 mm3.
Beim Zählen zählt man normalerweise die Gesamtzahl der Bakterien in fünf mittelgroßen Quadraten, ermittelt dann den Durchschnittswert jedes mittleren Quadrats und multipliziert ihn anschließend mit 16 oder 25, um die Gesamtzahl der Bakterien im großen Quadrat zu erhalten. Anschließend berechnet man die Gesamtzahl der Bakterien in 1 ml Bakterienlösung.
