(Unterschiede zwischen (Zwei-Photonen-, konfokalen) Fluoreszenzmikroskopen und gewöhnlichen Mikroskopen
Bei einem Fluoreszenzmikroskop wird ultraviolettes Licht als Lichtquelle verwendet, um das zu untersuchende Objekt zu bestrahlen, sodass das Objekt eine Lichtquelle aussendet, und dann wird das Objekt unter dem Mikroskop beobachtet. Es wird hauptsächlich für Immunfluoreszenzzellen verwendet und besteht hauptsächlich aus einer Lichtquelle, einem Filterplattensystem und einem optischen System, um das Fluoreszenzbild der Probe durch die Vergrößerung von Okular und Objektivlinse zu beobachten. Schauen wir uns an, welche Unterschiede es zwischen einem Fluoreszenzmikroskop und einem gewöhnlichen optischen Mikroskop gibt.
1, im Beleuchtungsmodus
Die Beleuchtung eines Fluoreszenzmikroskops erfolgt im Allgemeinen vom Typ „fallend“, das heißt, die Lichtquelle wird durch die Objektivlinse auf die Testprobe gerichtet.
2, in der Entschließung
Fluoreszenzmikroskope verwenden ultraviolettes Licht als Lichtquelle. Die Wellenlänge ist relativ kurz, die Auflösung ist jedoch höher als bei gewöhnlichen optischen Mikroskopen.
3. Der Unterschied im Filter
Bei Fluoreszenzmikroskopen werden zwei Spezialfilter verwendet. Einer vor der Lichtquelle filtert das sichtbare Licht heraus und der zwischen der Objektivlinse und dem Okular filtert das ultraviolette Licht heraus, wodurch das menschliche Auge geschützt werden kann.
Fluoreszenzmikroskope gehören ebenfalls zu den optischen Mikroskopen. Die Anregungswellenlänge von Fluoreszenzmikroskopen ist meist kurz, was zu unterschiedlichen Strukturen und Verwendungsmöglichkeiten von Fluoreszenzmikroskopen und gewöhnlichen Mikroskopen führt. Fluoreszenzmikroskope haben meist eine gute Funktion zur Erfassung schwacher Lichtverhältnisse, sodass sie bei extrem schwacher Fluoreszenz eine gute Bildgebungsleistung aufweisen. In Verbindung mit der kontinuierlichen Verbesserung von Fluoreszenzmikroskopen in den letzten Jahren wurde auch das Rauschen erheblich reduziert. Daher werden immer mehr Fluoreszenzmikroskope eingesetzt.
Das Zwei-Photonen-Fluoreszenzmikroskop bietet viele Vorteile:
(1) Längere Wellenlängen des Lichts werden weniger durch Streuung beeinflusst als kürzere Wellenlängen des Lichts, da es leicht in die Probe eindringt.
(2) Die fluoreszierenden Moleküle außerhalb der Brennebene werden nicht angeregt, so dass mehr Anregungslicht die Brennebene erreichen kann, so dass das Anregungslicht tiefer in die Probe eindringen kann.
3) Längere Wellenlängen des Nahinfrarotlichts sind für Zellen weniger toxisch als kürzere Wellenlängen;
4) Bei der Betrachtung einer Probe mit einem Zwei-Photonen-Mikroskop treten Photobleichung und Phototoxizität nur in der Brennebene auf. Daher sind Zwei-Photonen-Mikroskope für die Betrachtung dicker Proben, für die Beobachtung lebender Zellen oder für die Durchführung von Punkt-Photobleich-Experimenten besser geeignet als Ein-Photonen-Mikroskope.
