Unterschiede zwischen Fluoreszenzmikroskopie und konfokaler Mikroskopie
Fluoreszenzmikroskop
1. Fluoreszenzmikroskop verwendet ultraviolettes Licht als Lichtquelle, um das inspizierte Objekt zu bestrahlen, wodurch es die Fluoreszenz emittiert und dann die Form und Position des Objekts unter dem Mikroskop beobachtet. Die Fluoreszenzmikroskopie wird verwendet, um die Absorption, den Transport, die Verteilung und die Lokalisierung von Substanzen in Zellen zu untersuchen. Einige Substanzen in Zellen wie Chlorophyll können fluoreszieren, wenn sie ultraviolettem Strahlung ausgesetzt werden; Es gibt auch einige Substanzen, die die Fluoreszenz nicht selbst emittieren können, können aber auch Fluoreszenz emittieren, wenn sie mit fluoreszierenden Farbstoffen oder fluoreszierenden Antikörpern gefärbt und mit ultraviolettem Licht bestrahlt werden. Die Fluoreszenzmikroskopie ist eines der Werkzeuge für qualitative und quantitative Forschungen zu solchen Substanzen.
2. Prinzip des Fluoreszenzmikroskops:
(A) Lichtquelle: Die Lichtquelle emittiert das Licht verschiedener Wellenlängen (von Ultraviolett bis Infrarot).
(B) Anregungsfilterlichtquelle: Übertragung des Lichts einer bestimmten Wellenlänge, die die Fluoreszenz im Probe verursachen kann, während sie Licht blockiert, das für aufregende Fluoreszenz nutzlos ist.
(C) Fluoreszenzproben: normalerweise mit fluoreszierenden Pigmenten gefärbt.
(D) Blockierungsfilter: Er überträgt die Fluoreszenz selektiv, indem das Anregungslicht blockiert wird, das nicht von der Probe absorbiert wird, und einige Wellenlängen in der Fluoreszenz werden ebenfalls selektiv übertragen. Ein Mikroskop, das ultraviolettes Licht als Lichtquelle verwendet, um das beleuchtete Objekt Fluoreszenz zu emittieren. Das Elektronenmikroskop wurde 1931 zuerst von Knorr und Haruska in Berlin zusammengestellt. In diesem Mikroskop werden Hochgeschwindigkeitselektronenstrahlen anstelle von Lichtstrahlen verwendet. Aufgrund der viel kürzeren Wellenlänge des Elektronenflusses im Vergleich zu Lichtwellen kann die Vergrößerung eines Elektronenmikroskops 8 0 0000 -mal erreichen, mit einer Mindestauflösungsgrenze von 0,2 Nanometern. Das erstmals 1963 verwendete Rasterelektronenmikroskop ermöglicht es Menschen, die winzigen Strukturen auf der Oberfläche von Objekten zu sehen.
3. Anwendungsbereich: Wird verwendet, um Bilder kleiner Objekte zu vergrößern. Im Allgemeinen für Beobachtungen von Biologie, Medizin, mikroskopischen Partikeln usw. verwendet.
konfokales Mikroskop
1. Konfokales Mikroskop fügt dem reflektierten Lichtpfad eine halbreflektierende Halblinse hinzu, die das reflektierte Licht ablenkt, das in andere Richtungen durch die Linse gefahren ist. An seinem Brennpunkt befindet sich eine Schalltätigkeit mit einem Loch, das sich am Brennpunkt befindet, und hinter der Schallwand befindet sich ein Fotomultiplikator -Rohr. Es kann sich vorstellen, dass das reflektierte Licht vor und nach dem Erkennungslicht nicht auf das kleine Loch durch dieses konfokale System konzentriert werden und von der Schalltätigkeit blockiert wird. Daher misst das Photometer die reflektierte Lichtintensität am Brennpunkt.
2. Prinzip: Traditionelle optische Mikroskope verwenden Feldlichtquellen, und das Bild jedes Punktes auf der Probe wird durch Beugung oder gestreutes Licht von benachbarten Punkten beeinflusst. Das konfokale Laserscanning -Mikroskop verwendet einen Laserstrahl, um ein Lochloch zu beleuchten und eine Punktlichtquelle zu bilden, um jeden Punkt auf der Fokusebene der Probe zu scannen. Der beleuchtete Punkt auf der Probe wird am Nachweispinloch abgebildet und von einem Photomultiplierrohr (PMT) oder einem kalten Kopplungsgerät (CCCD) nach Erkennung des Pinlochs Punkt für Punkt oder eine Leitung empfangen, wobei das Pinloch schnell ein Fluoreszenzbild auf dem Bildschirm des Computermonitors bildet. Das Beleuchtungsstich und das Nachweisspinloch sind relativ zur Fokusebene der objektiven Linse konjugiert. Die Punkte auf der Brennebene konzentrieren sich gleichzeitig auf das Beleuchtungsstich und das Emissionsloch, und Punkte außerhalb der Brennebene werden am Erkennungsspiegel nicht abgebildet. Das resultierende konfokale Bild ist der optische Querschnitt des Probens, der den Nachteil von verschwommenen Bildern in allgemeinen Mikroskopen überwindet.
