Bestimmung der Anzahl von Mikroorganismen - Mikroskopische Direktzählmethode!
Das Wachstum einer Bakterienpopulation äußert sich in einer Zunahme der Zellzahl oder einer Zunahme des Zellmaterials. Methoden zur Bestimmung der Zellzahl umfassen direkte mikroskopische Zählung, Plattenzählung, Trübungsschätzung durch Spektralphotometer, wahrscheinlichste Zahl MPN und Membranfiltration (Membranfiltration) usw. Methoden zur Messung zellulärer Substanzen umfassen die Bestimmung des Zelltrockengewichts, die Bestimmung bestimmter Zellkomponenten wie Stickstoffgehalt, RNA- und DNA-Gehalt und die Bestimmung von Metabolitenprodukten. Kurz gesagt, es gibt viele Methoden zur Messung des mikrobiellen Wachstums, jede mit ihren eigenen Vor- und Nachteilen. Die Methode sollte entsprechend den spezifischen Anforderungen der Arbeit ausgewählt werden. Dieses Experiment stellt hauptsächlich die Methode der direkten Mikroskopzählung vor, die häufig in der Produktion und bei wissenschaftlichen Forschungsarbeiten verwendet wird.
1. Zweckanforderungen
1. Erläutern Sie das Prinzip der Zählung mit einem Blutzellzählbrett.
2. Beherrschen Sie die Methode zum Zählen von Mikroorganismen mithilfe einer Blutzellzähltafel.
2. Grundprinzipien
Die Methode der direkten Zählung unter dem Mikroskop ist eine einfache, schnelle und intuitive Methode, bei der eine kleine Menge der Suspension der zu untersuchenden Probe auf einen speziellen Objektträger mit einer bestimmten Fläche und einem bestimmten Volumen (auch Bakteriometer genannt) gegeben und direkt unter dem Mikroskop gezählt wird. Methoden. Derzeit sind im In- und Ausland häufig verwendete Bakteriometer: Hämozytometer, Peteroff-Hauser-Bakteriometer und Hawksley-Bakteriometer usw. Sie alle können zum Zählen von Hefe, Bakterien, Schimmelsporen und anderen Suspensionen verwendet werden und die Grundprinzipien sind dieselben. Die beiden letztgenannten Bakterienzähler haben nach dem Abdecken mit einem Deckglas ein Gesamtvolumen von 0.02mm3 und der Abstand zwischen dem Deckglas und dem Objektträger beträgt nur 0,02 mm. Daher kann eine Ölimmersionsobjektivlinse verwendet werden, um kleinere Zellen wie Bakterien zu beobachten und zu zählen. Neben der Verwendung dieser Bakteriometer gibt es auch eine Schätzmethode, bei der das Verhältnis der Abstrichfläche zur Sichtfeldfläche unter einem Mikroskop direkt beobachtet wird. Diese Methode wird im Allgemeinen zur bakteriologischen Untersuchung von Milch verwendet. Die Vorteile der direkten Zählmethode unter dem Mikroskop liegen darin, dass sie intuitiv, schnell und einfach zu bedienen ist. Der Nachteil dieser Methode besteht jedoch darin, dass das Messergebnis normalerweise die Summe der toten und lebenden Bakterien ist. Derzeit gibt es einige Methoden, um diesen Mangel zu überwinden, z. B. die Kombination einer Mikrokammerkultur mit Färbung lebender Bakterien (kurze Zeit) und die Zugabe von Zellteilungsinhibitoren, um das Ziel zu erreichen, nur lebensfähige Bakterien zu zählen.
In diesem Experiment wird ein Hämozytometer als Beispiel verwendet, um eine direkte Zählung unter einem Mikroskop durchzuführen. Informationen zur Verwendung der beiden anderen Bakteriometer finden Sie in den Anweisungen des jeweiligen Herstellers. Die direkte Zählung unter einem Mikroskop mithilfe eines Hämozytometers ist eine häufig verwendete Methode zur mikrobiellen Zählung. Die Zählplatte ist ein spezieller Objektträger mit vier Rillen, die drei Plattformen bilden. Die breitere Plattform in der Mitte ist durch eine kurze horizontale Rille in zwei Hälften unterteilt, und auf jeder Seite der Plattform befindet sich ein Gitterraster. Jedes quadratische Gitter ist in neun große Quadrate unterteilt, und das große Quadrat in der Mitte ist der Zählraum. Die Struktur der Blutzellenzählplatte ist in Abbildung {{0}} dargestellt. Es gibt im Allgemeinen zwei Spezifikationen für den Maßstab der Zählkammer. Eine ist ein großes Quadrat, das in 25 mittelgroße Quadrate unterteilt ist, und jedes mittelgroße Quadrat ist in 16 kleine Quadrate unterteilt (Abbildung 15-2); die andere ist ein großes Quadrat. Das quadratische Gitter ist in 16 mittelgroße Quadrate unterteilt, und jedes mittelgroße Quadrat ist in 25 kleine Quadrate unterteilt. Jedoch, egal um welche Art von Zählbrett es sich handelt, gibt es in jedem großen Quadrat 400 kleine Quadrate. Die Seitenlänge jedes großen Quadrats beträgt lmm, also beträgt die Fläche jedes großen Quadrats lmm2. Nachdem das Deckglas abgedeckt wurde, beträgt die Höhe zwischen Deckglas und Objektträger 0,1mm, also beträgt das Volumen der Zählkammer 0,1mm3 (ein Zehntausendstel Milliliter). Abbildung 15-1 Aufbau des Blutzellenzählbretts (1) Abbildung 15-2 Aufbau des Blutzellenzählbretts (2) A. Vorderansicht; B. Längsschnitt; vergrößertes quadratisches Raster, das große Quadrat in der Mitte ist die Zählkammer 1. Blutzellenzählbrett; 2. Deckglas; 3. Beim Zählen in der Zählkammer zählt man normalerweise die Gesamtzahl der Bakterien in fünf Quadraten, ermittelt dann den Durchschnittswert jedes Quadrats und multipliziert ihn dann mit 25 oder 16, um zu erhalten. Die Gesamtzahl der Bakterien in einem großen Quadrat wird dann in die Gesamtzahl der Bakterien in 1 ml Bakterienlösung umgerechnet. Angenommen, die Gesamtzahl der Bakterien in den fünf mittleren Quadraten ist A und der Verdünnungsfaktor der Bakterienlösung ist B. Wenn es sich um eine Zählplatte mit 25 mittleren Quadraten handelt, dann beträgt die Gesamtzahl der Bakterien in 1 ml der Bakterienlösung=A/5×25×104× B=50000A·B (Stücke). Wenn es sich entsprechend um eine Zählplatte mit 16 Quadraten handelt, dann beträgt die Gesamtzahl der Bakterien in 1 ml Bakterienlösung =A/5×16×104×B=32000A·B (Stücke).
