Biomikroskopie hinsichtlich des Volumens von Gewebeblöcken
Biologische Mikroskopie Bisher sind Kaltfixierung, gefrorener Ultradünnschnitt und Gefriertrocknung Routinemethoden für Röntgenmikroschnitte von Gewebe und Zellen. Die Einzelheiten dieser Methode werden wie folgt erläutert:
Bei biologischen Mikroskopen mit Kondensor kann der Kondensor nach oben und unten bewegt werden, um die Helligkeit moderat zu machen, und die Apertur des variablen Lichts kann auch geändert werden, um eine moderate 9b-Helligkeit zu erreichen. Bei sonnigem Licht kann der Kondensor entsprechend angehoben und die Apertur der variablen Lichtquelle entsprechend vergrößert werden. Bei zu starkem Licht kann die Kondensorlinse entsprechend abgesenkt und die Apertur des kreuzenden Lichts entsprechend verkleinert werden. Wenn Sie in diesem Fall immer noch das Gefühl haben, blendend zu sein, können Sie einen geeigneten Filter auswählen und ihn auf der Halterung unter dem Kondensator platzieren. Diese Eiche wird in der Lage sein, die Helligkeit zu erreichen, die Sie zufriedenstellt. Natürlich erfordert die Einstellung der oberen und unteren Position des Kondensors, die Einstellung der Blendengröße der variablen optischen Anzeige und die Auswahl eines geeigneten Filters eine gewisse Übungszeit, um Erfahrungen zu sammeln.
Ein sehr wichtiges Thema in der biologischen Mikroskopie ist, dass bei der Probenahme und Trennung von Zellen, nach der Gefriertrocknung und Harzeinbettung (FD), nach dem Einfrieren ultradünner Aggregate und nach der Gefriertrocknung der Gehalt an 65 Elementen in jedem Teil ermittelt wird muss sorgfältig gehandhabt werden. Die zu analysierenden Zellen können nicht beschädigt werden. Denn die Röntgenmikroanalyse ist nicht nur mit vielen Schritten verbunden, sondern auch mit hohen Kosten verbunden. Wenn es sich bei den analysierten Zellen um beschädigte Zellen oder nach längerer Zeit und mehrstufiger Verarbeitung um tote Zellen handelt, ist es sehr bedauerlich, falsche Schlussfolgerungen zu ziehen. Beispielsweise haben durch Kollagenasebehandlung getrennte Kardiomyozyten zwei Formen: eine ist langstabförmig und die andere rund. Bei Letzteren handelt es sich um absterbende Zellen, die bei der Zellisolierung geschädigt werden.
Biomikroskopie Die Menge und Verteilung der Elektrolyte in diesen beiden Zelltypen ist sehr unterschiedlich. In zirkulären Kardiomyozyten ist Na sehr hoch und K sehr niedrig, und die Ca-Konzentration in Nematoden ist sehr hoch. Nach Überprüfung mit anderen Analysemethoden wurde nachgewiesen, dass der hohe Na- und niedrige K-Gehalt in Rundzellen sowie der hohe Ca-Gehalt in Mitochondrien auf die Schädigung der Zellmembran während des Zelltrennungsprozesses zurückzuführen sind. Die eiskalte Fixierungsmethode von Zellen und Geweben besteht normalerweise darin, zunächst abzuschrecken und zu fixieren und sie dann in flüssigem Stickstoff zu lagern. Für die Wirkung der Konservierung ist die Abschreckfixierung sehr wichtig. Lebende Zellen oder frisches Gewebe sind reich an Wasser. Beim Abschrecken werden oft die Teile der Zellen oder Gewebe, die in direktem Kontakt mit dem zerkleinerten Kältemittel stehen (insbesondere beim Abschrecken mit flüssigem Stickstoff), zuerst eingefroren und fixiert und bilden so eine „Hülle“, die die zentralen Teile der Zellen behindert zerkleinert und kaltfixiert. Daher wird bei der X-Linien-Mikrobereichsanalyse häufig festgestellt, dass sich in der Mitte größerer Zellen Eiskristalle befinden. Um dies zu verhindern, wird als gebrochenes Kältemittel eine Substanz verwendet, deren Schmelzpunkt höher als der von flüssigem Stickstoff, aber niedriger als der von 806c ist. Es gibt viele solcher Substanzen, aber die billigste ist konzentriertes Propan (Siedepunkt - 42.120 °C, Schmelzpunkt - 187.10 °C, Molekulargewicht 44,1), und die Abkühlgeschwindigkeit ist am schnellsten. Sein Nachteil ist jedoch, dass es brennbar ist.
Ein biologisches Mikroskop kann die Muskelfaser auf ein spezielles Gestell legen, so dass, wenn die Muskelfaserkontraktion eine bestimmte Phase erreicht und fixiert werden muss, sofort die Düse gestartet wird, um flüssiges Propan auf die Muskelfaser zu sprühen, um sie zu löschen und zu fixieren. Anschließend wurden die Muskelfasern samt Rahmen herausgenommen und in flüssigen Stickstoff gelegt. Wenn Sie Blutzellen oder isolierte Zellen fixieren, konzentrieren Sie die Zellen zunächst durch Zentrifugation bei niedriger Geschwindigkeit, übertragen Sie die Zellen in ein Silberfläschchen mit guter Wärmeleitfähigkeit, stellen Sie das Fläschchen in flüssiges Propan und frieren Sie es zur Fixierung ein. Bei der Fixierung der Ratten-Bauchspeicheldrüse im Hall-Labor wurden die beiden Stahlblöcke mit flüssigem Helium (oder flüssigem Stickstoff) vorgekühlt und die beiden Kupferblöcke mit einer Pinzette festgeklemmt und zum Abschrecken und Fixieren auf die Vorder- und Rückseite der Bauchspeicheldrüse gelegt die Bauchspeicheldrüse. Gewebe oder Zellen können nach dem Abschrecken und Fixieren zur Langzeitlagerung in flüssigem Stickstoff gelagert werden.
Biologische Mikroskopie Neben der angesehensten gefrorenen Ultradünnschnittmethode gibt es hier eine weitere Abscheidungstechnik, die von Wissenschaftlern verwendet wird. Eine Substanz wird hinzugefügt, um mit der zu analysierenden Komponente ein Sediment zu bilden, um sie vor der Analyse zu immobilisieren, und das Sediment wird dann analysiert. Beispielsweise verwenden Menschen häufig Oxalat und Pyroantimonat, um Kalzium in Muskelzellen abzulagern. Ersteres reagiert nicht empfindlich genug auf die niedrige Ca-Konzentration im Zytoplasma; Pyroantimonat ist empfindlicher und kann mit freiem Ca im Gehirn elektronendichte Ablagerungen bilden, Pyroantimonat ist jedoch nicht kompatibel mit Natrium, Mangan, Barium und Eisen. Es bilden sich auch Ablagerungen, die weniger spezifisch sind. Der Probenvorbereitungsprozess ähnelt der Vorbereitung gewöhnlicher Ultradünnschnittproben mit dem Transmissionselektronenmikroskop. Der Unterschied besteht darin, dass 3 Prozent Kaliumpyroantimonat (Phosphatpuffer-Kochsalzlösung, pH 7,6) vor der Fixierung 6 Stunden lang fixiert wurden und auf den gefärbten Muskel-Ultradünnschnitten In den Mittellinien der Bänder A und 2 jedes Sarkomers waren schwarze Ablagerungen zu erkennen, und ungefärbte Schnitte wurden für die Röntgenmikroanalyse verwendet. Diaminobenzidintetrahydrochlorid (DAB) wurde zur Ausfällung hämhaltiger Substanzen usw. verwendet. Die Kombination aus histochemischer Fällungsreaktion und Röntgenmikrodifferenzierungsbrücke kann in Laboratorien in Betracht gezogen werden, in denen keine Bedingungen für gefrorene Ultradünnschnitte herrschen. Halbquantitativ kann entsprechend der Peakhöhe der zu analysierenden Elemente durchgeführt werden
